[发明专利]用于治疗性治疗肿瘤疾病的来源于成体干细胞的微泡（MV）

说明书

本发明涉及肿瘤疾病的治疗性治疗（治疗性处理，therapeutic treatment）。

已知造血干细胞移植在患有实体瘤的患者中发挥肿瘤抑制作用，以及在转移性乳腺癌、肾癌、卵巢癌、前列腺癌和胰腺癌中发挥抗肿瘤作用。

证明了人类骨髓间质干细胞（BM-MSC）有助于多种器官的修复和组织修复，且实验性研究表明，MSC的移植可对包括心脏、肝脏和肾的几种器官的功能和结构恢复具有有益的作用。

干细胞微环境通过提供抑制增殖和促进分化的信号，似乎在预防癌发生中起到重要作用。

然而，由于已经报道了这种干细胞治疗的潜在的致瘤的风险，干细胞在治疗适应症中的应用是不太可取的（Amariglio N et al.Donor-derived brain tumor following neural stem cell transplantation in an ataxia telangiectasia patient.PLoS Med.2009 Feb 17;6(2)）。

细胞来源的微泡（microvesicle，MV）是通过表达细胞特有的抗原的细胞而释放的小泡，其中它们起源于细胞且携带细胞膜和细胞质成分，且已经被描述为细胞通讯的新的机制。最近，本发明的发明人已经证明了，来源于人类内皮祖细胞（endothelial progenitor cells）（EPC）、BM-MSC和肝脏的肝干细胞的微泡可用作遗传材料（mRNA）的转移的媒介物，其中所述遗传材料能重编程靶分化细胞，如内皮细胞、管状上皮细胞（小管上皮细胞，tubular epithelial cell）和肝细胞（Deregibus MC et al.Endothelial progenitor cell derived microvesicles activate an angiogenic program in endothelial cells by a horizontal transfer of mRNA.Blood.2007 Oct 1;110(7):2440-8;Bruno S et al.Mesenchymal stem cell-derived microvesicles protect against acute tubular injury.J Am Soc Nephrol.2009 May;20(5):1053-67;Herrera MB et al.Human liver stem cell-derived microvesicles accelerate hepatic regeneration in hepatectomized rats.J Cell Mol Med.2009Jul 24），且有助于组织再生和修复。

国际专利申请WO2009/087361公开通过将诱导物应用于未分化细胞的第一群（落）而生产分化的细胞，然后从分化的细胞分离微泡。参见WO2009/087361第30页上那个方面中的第一完整段落。未分化的细胞的第一个群是例如骨髓间质干细胞。然而，WO2009/087361没有公开直接从未分化的细胞获得微泡。

本发明的发明人现在已经发现，来源于成体干细胞，优选来源于骨髓或肾小球间质干细胞（glomerular mesenchymal stem cell）或来源于非卵肝干细胞（non-oval liver stem cells）的微泡，在体内和体外表现显著的抗肿瘤活性，因此代表用于癌症的治疗性治疗的相应的整个干细胞范围内有利的可替换物。在体外通过测量微泡在多种人类癌细胞系的增殖和凋亡上以及它们在毛细管样结构的形成上的作用，证明依照本发明来源于成体干细胞的微泡的抗肿瘤活性。在体内小鼠模型中通过测量MV治疗（处理）对肿瘤生长的作用也证实了微泡的抗肿瘤活性。

在现有技术上，完全想不到来源于成体干细胞的微泡的观察到的抗肿瘤活性。实际上已知间质干细胞（MSC）的制剂对某些组织发挥再生作用。例如，已知骨髓来源的MSC通过分泌许多营养分子自然地支持造血作用，所述营养分子包括可溶解的细胞外基质糖蛋白、细胞因子和生长因子。此外，在WO2009/050742中显示来源于内皮干细胞的微泡在体外和体内促进血管生成和抵抗凋亡。在WO2009/057165中，已知来源于干细胞的微泡诱导受损的组织或器官的内皮和上皮再生。

在WO2009/105044中，推测性地说来源于间质干细胞的微泡适合于用于多数和多种疾病的治疗。没有提供关于癌症治疗的实验证据、理论解释和具体方法。