[发明专利]免疫球蛋白G Fc区结合多肽

说明书

发明领域

本发明涉及结合免疫球蛋白G Fc (IgG Fc)的多肽及其生产方法。所述多肽在例如抗体和/或Fc融合蛋白生产中的分离和/或纯化中，例如在色谱法中具有工业应用。

背景

在单克隆抗体和Fc融合蛋白的工业生产中，经常使用色谱法进行纯化。由于蛋白A对IgG的Fc部分的天然亲和力，来自金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的蛋白A早已在所述应用中被用作亲和配体。其后，蛋白A以其整体，及其五个单独的Fc-结合结构域被用作用于合理设计具有改进性能的经工程改造亲和配体的起始点。

例如，蛋白A的B结构域被用作用于产生经工程改造的、IgG Fc-结合的、单个结构域蛋白Z的起始点(Nilsson B等，Protein Eng 1(2):107-13，1987)。为了改进该蛋白在碱性条件下，例如在工业色谱过程期间用于原位清洗程序的条件下的稳定性，Linhult等(Proteins 55(2):407-16，2004)提出包含突变的天冬酰胺残基的蛋白Z变体。GE Healthcare、Uppsala、Sweden将该突变体进一步开发为市售产品MAbSelect? SuRe。WO2009/146755公开了另外的具有IgG Fc亲和力的Z变体。

WO2009/080811描述了基于蛋白Z的突变的结合蛋白，其中天然的IgG Fc结合被修饰。

已表明具有五个单独的IgG Fc-结合结构域的天然蛋白A只结合2分子的IgG或3分子的重组Fc片段，但事实上五个结构域中的每一个都具有结合一个IgG的能力(Birger Jansson，PhD论文，Stockholm，Sweden，1996，ISBN 91-7170-656-9)。

尽管目前使用的IgG Fc亲和配体比较成功，但仍需要改进，特别是关于改进化学计量(stoichiometry)并同时保持且理想地改进对于酸性和碱性条件的稳定性的联合需求。不断提供具有对于IgG Fc的亲和力的试剂仍是一个极为关注的问题。

发明概述

根据其第一方面，本发明提供免疫球蛋白G Fc (IgG Fc)结合多肽，所述多肽包含选自以下的氨基酸序列：

其中，彼此独立地，

X₁为P或无；

[间隔基1]为由1-3个氨基酸残基组成的氨基酸序列；

X₁₇为任何氨基酸残基；

X₂₀为任何氨基酸残基；

X₃₆为除D外的任何氨基酸残基；

X₅₁为任何氨基酸残基；

[间隔基2]为由0-20个氨基酸残基组成的氨基酸序列；

X_CTERM为D或无；以及

n为1-4；

和

ii) 与i)中限定的序列具有至少95%同一性的氨基酸序列。

在本发明该方面的一个实施方案中，免疫球蛋白G Fc (IgG Fc)结合多肽由选自如上限定的i)和ii)的氨基酸序列组成。

本发明人已构想了本发明多肽的氨基酸序列，以便提供优化的IgG Fc-结合分子，其以来自葡萄球菌(Staphylococcus)的蛋白A的多个结构域和衍生自蛋白A的B结构域的蛋白Z作为起始点。与天然蛋白A或其先前已知的经工程改造变体的模块结构域结构类似，本发明的多肽提供一个或多个具有IgG Fc-结合能力的独特结构域。特别地，预测两间隔基序列之间的氨基酸序列折叠成具有IgG Fc-结合能力的单个三螺旋束结构域。如上所述，数字n可在1至4之间，表明本发明的多肽可具有1至4个被间隔基序列分开的独特IgG Fc-结合结构域，构成所述结构域的单体、二聚体、三聚体或四聚体。

在蛋白Z中，对应于上述氨基酸序列i)中17位的氨基酸位置被组氨酸残基占据。在本发明多肽中，X₁₇可为H，但也可被任何其它氨基酸残基取代。该位置的取代可由对避免化学反应性氨基酸的通常需求引起。