[发明专利]胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶抑制剂及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及有机化学、丝氨酸蛋白酶(特别是纤溶酶和血浆激肽释放酶)和止血领域，以及凝血级联系统和纤维蛋白溶解的治疗性调节。

背景技术

纤溶酶(EC3.4.21.7，溶纤维蛋白溶酶)是胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶，其影响精氨酸或赖氨酸残基处的蛋白质裂解；其主要底物为纤维蛋白和细胞外基质(ECM)蛋白样纤连蛋白。其他的纤溶酶底物包括多种基底膜蛋白，例如层粘连蛋白和IV型胶原蛋白，以及酶原，例如尿激酶和基质金属蛋白酶的前体。血液中，纤溶酶主要负责纤维蛋白溶解，其将纤维蛋白裂解为可溶性片段。纤溶酶由其前体酶原即纤溶酶原，在纤溶酶原激活剂的裂解作用下被激活，纤溶酶原激活剂主要为丝氨酸蛋白酶，如尿激酶、组织型纤溶酶原激活剂(tPA)和血浆激肽释放酶(EC 3.4.21.34；激肽释放酶，PK)。

内源性纤溶酶抑制剂，如α₂-巨球蛋白和α₂-抗纤溶酶，通过减弱纤溶酶原激活剂的抗凝血作用，对纤维蛋白溶解的调节起关键作用。某些病理情况(高纤维蛋白溶酶血症)的特征为纤溶酶调节异常和纤维蛋白溶解的自发激活，这所导致的使创伤闭合的纤维蛋白的降解，会因纤维蛋白原降解产物的抗凝血特性而加剧，并导致凝血系统严重损伤。

临床上使用抗纤维蛋白溶解药物治疗如上状况，其中常用的试剂为合成的氨基被取代的羧酸，例如对氨甲基苯甲酸、ε-氨基己酸、反-4-(氨甲基)-环己甲酸(凝血酸)。这些化合物阻碍纤溶酶原与纤维蛋白结合，从而抑制纤溶酶产生，但它们不是纤溶酶的直接抑制剂，并不抑制已经生成的纤溶酶的活性。直接抗纤维蛋白溶解的是抑肽酶(TRASYLOL^TM，Bayer AG，Leverkusen)，这是一种取自牛肺的58个氨基酸的多肽。抑肽酶对纤溶酶的抑制常数为1nM，但相对无特异性：它可有效抑制胰蛋白酶(K_i=0.1 nM)、血浆激肽释放酶(K_i=30 nM)，并在较小程度上抑制其他多种酶。

抑肽酶主要用于减少失血，特别是在心肺转流(CPB)术下的心脏外科手术中，其中抑肽酶显著减少了围手术期输血的需要(Sodha et al.,Expert Rev.Cardiovasc.Ther.,4,151-160，2006)。抑肽酶也在其他手术中用于预防失血，其他手术例如器官移植；其也和纤维蛋白粘合剂联合使用。

抑肽酶的使用存在一些缺点。由于抑肽酶分离自牛肺，所以原则上存在病原体污染和过敏反应的风险。首次给予抑肽酶时过敏性休克的发生率明显较低(<0.1%)，但200天内重复给药后比率增加至4-5%。已有报道显示与ε-氨基己酸或凝血酸直接相比较，给予抑肽酶将导致更多的副作用(Mangano et al.,New Engl.J. Med.,354,353-365,2006)。与对照组相比，给予抑肽酶导致肾损伤而需要透析的情况加倍，且心肌梗死和类中风的发病率增加。使用纤维蛋白溶解剂保存血液的随机试验(BART)研究显示，与使用赖氨酸类似物相比，高危心脏外科患者使用抑肽酶的致死风险增加(Fergusson et al.,New Engl.J.Med.,358,2319-2331,2008)，该药物已从市场撤回。

现已公开许多纤溶酶的合成抑制剂。Sanders(Sanders and Seto,J.Med.Chem.,42,2969-2976,1999)描述了具有相对低活性的4-杂环己酮衍生物，对纤溶酶的抑制常数为≥50μM。Xue(Xue and Seto,J.Med.Chem.,48,6908-6917,2005)已报道肽环己酮衍生物的IC₅₀值≥2μM，但未报道进一步的研究结果。Okada(Okada et al.,Chem.Pharm.Bull.,48,1964-1972,2000；Okada et aL.,Bioorg.Med.Chem.Lett.,10,2217-2221,2000)和Tsuda(Tsuda et al.Chem.Pharm.Bull.,49,1457-1463,2001)描述了4-氨甲基-环己酸衍生物，其抑制纤溶酶的IC₅₀值≥0.1μM，但未报道这些抑制剂的临床使用情况。