[发明专利]使用PTEN-Long前导序列进行分子的跨膜递送

说明书

技术领域

本申请案主张2010年2月17日递交的第61/338,377号美国临时申请案的优先权，所述案以全文引用的方式并入本文中。

本文所揭示的工作是根据来自国家癌症研究所（National Cancer Institute）的批准号CA082783，在政府的支持下完成的。因此，美国政府享有本发明的某些权利。

在本申请案中，各种公开案在括号中以第一作者和年份来提及。这些参考的完整引用可在紧靠权利要求书前面的说明书结尾找到。这些公开案的揭示内容在此以全文引用的方式并入本申请案中，以更详细地描述本发明所涉及的技术现状。

背景技术

PTEN肿瘤抑制剂（参见WO98/34624，其以全文引用的方式并入本文中）是使重要的第二信使磷酯酰肌醇3,4,5-三磷酸（phosphatidylinositol 3,4,5-triphosphate）脱去磷酸的细胞质磷酸酶（马哈马（Maehama）和狄克逊（Dixon）  1998）。此活性下调了许多由PIP3激活Akt而起始的致瘤信号，这些信号包括抗细胞凋亡途径、细胞周期进程和渐增的细胞新陈代谢（苏黎世（Sulis）和帕森斯（Parsons）2003）。从许多不同肿瘤类型中PTEN在遗传上或功能上的频繁损失来看，PTEN在癌症中的作用是显而易见的（波奴（Bonneau）和隆基（Longy）2000）。起初在神经胶质癌中发现没有PTEN，从那以后，它已经在前列腺、乳房、子宫内膜、黑素细胞、肾和肺的肿瘤发生中有所涉及。PTEN中的种系突变也与遗传性癌症易感综合征，如考登氏综合征(Cowden's Syndrome）有关（英格（Eng）2003）。PTEN损失的小鼠模型简述了PTEN在杂合小鼠中和在许多不同组织类型中的组织特异性基因剔除中作为肿瘤抑制剂的作用（迪克里斯托夫（Di Cristofano）,帕斯（Pesce）等人1998；垮比艾多（Kwabi-Addo）,吉利（Giri）等人2001；帕特克里（Petrocelli）和斯林格兰多（Slingerland）2001；尤（You）,凯斯特林（Castrillon）等人2002；弗瑞瑟（Fraser）,朱（Zhu）等人2004）。

PTEN蛋白含有N末端双特异性磷酸酶结构域和C末端C2磷脂结合域，接着是具有调节重要性的非结构化尾（unstructured tail），这种重要性是由于在其中发现了磷酸化部位（李（Lee）,杨（Yang）等人1999；瓦斯科斯（Vazquez）,拉马斯瓦米（Ramaswamy）等人2000；托雷斯（Torres）和普利多（Pulido）  2001；瓦斯科斯（Vazquez）,格罗斯曼（Grossman）等人2001）。PTEN蛋白主要在细胞质中，然而，越来越多的证据表明在细胞核中存在PTEN，细胞核是由通过NEDD4-1使蛋白质单泛素化而调节的位置（贝克（Baker）2007；王（Wang）,特罗特曼（Trotman）等人2007）。

在起始密码子AUG处发生的翻译起始之前进行5'UTR的核糖体扫描。尽管核糖体决定适当起始密码子的实际方式仍未完全被理解，但是mRNA本身和指示起始前复合物将在何处减慢扫描并且开始翻译的序列都具有某些特性。典型的“科扎克序列（Kozak sequence）”CCACCATGG（其中加下划线的ATG是起始密码子）已显示为对起始最有利的序列情形（科扎克（Kozak）1991）。mRNA二级结构有可能通过起始前复合物扫描的实际减慢也促进起始，这需要螺旋酶在读取之前溶解二级结构（科扎克（Kozak）1990）。

在某些转录物中，翻译起始可从非AUG密码子开始发生。这通常只包含从转录物翻译的总蛋白的较小部分并且结果是在N末端变化的混合种类的蛋白质。科扎克（Kozak）描述了从非AUG密码子开始的翻译起始效率并且发现了GUG和CUG都能在试管内起始翻译，但效率低得多（科扎克（Kozak）1989）。进一步研究已显示甲硫氨酸的有效性可通过一种尚不明朗的机制来改变翻译起始的混乱性，但是可能涉及由营养敏感性激酶使43S起始前复合物的成分eIF2磷酸化（荷西（Hershey）1991；汉恩（Hann）1994）。