[发明专利]展示抗体的方法无效
申请号: | 201180018943.1 | 申请日: | 2011-04-12 |
公开(公告)号: | CN103476941A | 公开(公告)日: | 2013-12-25 |
发明(设计)人: | 亨利·吉;周和悦;张彦良;查尔斯·罗迪 | 申请(专利权)人: | 索伦托治疗有限公司 |
主分类号: | C12P21/00 | 分类号: | C12P21/00 |
代理公司: | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人: | 黎艳;万志香 |
地址: | 美国加*** | 国省代码: | 美国;US |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 展示 抗体 方法 | ||
技术领域
本发明公开提供载体的设计,构建和构建展示抗体,比如全长免疫球蛋白类,单链抗体(SCA) scFv,或Fab于寄主细胞表面的抗体库的方法。本发明也提供为选择性的抗体目标从上述的抗体库中分离想要的抗体结合者的筛选方法。
背景技术
抗体是有价值的,在各种分子生物学过程用作治疗剂和一般试剂。现有生产多克隆和单克隆抗体的方法,如许多抗体。许多基本文献描述标准的抗体生产过程,包括:Borrebaeck 的Antibody Engineering, 2nd Edition Freeman and Company, NY, 1995; McCafferty 等人的Antibody Engineering, A Practical Approach IRL at Oxford Press, Oxford, England, 1996和Paul (1995) 的Antibody Engineering Protocols Humana Press, Towata, NJ, 1995;Paul (ed.)的Fundamental Immunology, Raven Press, N.Y, 1993; Coligan (1991) 的Current Protocols in Immunology Wiley/Greene, NY; Harlow and Lane (1989) Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Press, NY; Stites 等人 (eds.) Basic and Clinical Immunology (4th ed.) Lange Medical Publications, Los Altos, Calif., 并在此引用作为参考; Coding Monoclonal Antibodies: Principles and Practice (2nd ed.) Academic Press, New York, NY, 1986, 以及 Kohler and Milstein Nature 256: 495-497, 1975。
自然产生的抗体,或免疫球蛋白(Igs),包括四条基本的多肽链结构,所述多肽链结构包括两条相同的重链和两条相同的轻链,所述重链和轻链通过链内和链间的二硫键稳定和横向连接。不同的抗体类型该四链结构的变异体,每条重链在其N端包括一个可变区域,其后有多个恒定区域。每条轻链在其N端具有一个可变区域并在其C端具有一个恒定区域。因为最大数量的序列变异集中在轻链和重链的N端区域;每个这些区域被称为可变(V) 区域(或“V区”) 。恒定区域组成恒定区,恒定区包括剩下的分子并呈现相对小的序列变化。重链包括五种主要的类型,取决于抗体的类型,并由大约450-600氨基酸残基组成。轻链有两种主要的类型并具有大约230个氨基酸残基。重链和轻链都折叠成区域,包括球状多肽区。
抗体通常包括两条大的重链和两条小的轻链。有五种类型的哺乳动物免疫球蛋白重链。它们由希腊字母表示:α, δ, ε, γ 和μ。目前重链的类型定义抗体的种类- IgA,IgD,IgE,IgG和 IgM。每条重链包括恒定区和可变区。有两种类型的轻链- lambda (λ) 和kappa (κ)。每条轻链包括恒定区和可变区。所有相同的同种型抗体的恒定区是相同的。不同的B细胞产生的抗体的可变区不同,但单个B细胞产生的所有的抗体的可变区是相同的。
抗体结合抗原的部分(抗原结合位点)包含在Fab(片段,抗原结合)区中。Fab区由(a)重链的恒定和可变区域,和(b)轻链恒定和可变区域组成,可变区域称为FV区。轻链可变区域缩写为VL。重链可变区域缩写为VH。
抗体调节免疫细胞活性的部分被称为Fc(片段,结晶)区。Fc区由两条重链的恒定区组成。
在抗体中,轻链的可变区域与重链的可变区域对齐;轻链的恒定区域与重链的第一恒定区域对齐。每对轻链和重链的可变区域形成抗原结合位点,抗原结合位点使抗体结合至抗原的表位。轻链和重链的恒定区域不直接参与抗原结合。每个重链或轻链可变区域包括四个相对保守的骨架(FR)区(或骨架片段),骨架区通过3个高变区或互补决定区(CDRs)分开和连接。互补决定区被认为使抗体接触目标抗原并主要负责抗体与抗原的结合。
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