[发明专利]排除假阴性的PCR 检测方法和其中使用的引物

权利要求书

1.一种微生物检测方法，所述微生物检测方法包括：应用用于扩增样品中可能存在的微生物的靶基因序列的第1引物对以及用于扩增所述样品中的阳性对照基因序列的第2引物对进行PCR反应，在所述阳性对照基因序列被扩增而所述靶基因序列不被扩增时判定为所述微生物不存在，在所述阳性对照基因序列被扩增而且所述靶基因序列也被扩增时判定为所述微生物存在；其中，所述PCR反应中的所述靶基因的检测灵敏度和所述阳性对照基因的检测灵敏度是同等的。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，第1引物对中的至少1个引物中相对于靶基因序列的互补序列存在变异；和/或第2引物对中的至少1个引物中相对于阳性对照基因序列的互补序列存在变异。

3.根据权利要求1或2所述的方法，微生物为糖化酵母，靶基因为STA1，阳性对照基因为酵母的26S rDNA。

4.根据权利要求2或3所述的方法，变异为核苷酸在第1引物对或者第2引物对中的至少1个引物中的插入。

5.根据权利要求4所述的方法，第1引物对为如下一对引物：包含序列号1的序列的引物以及包含序列号3的序列的引物。

6.根据权利要求2～5的任一项所述的方法，第2引物对为如下一对引物：包含序列号4的序列的引物以及包含序列号5的序列的引物。

7.一种引物组，所述引物组包含用于扩增样品中可能存在的微生物的靶基因序列的第1引物对以及用于扩增所述样品中的阳性对照基因序列的第2引物对；同一PCR反应条件下所述靶基因的检测灵敏度和所述阳性对照基因的检测灵敏度是同等的。

8.根据权利要求7所述的引物组，第1引物对中的至少1个引物中相对于靶基因序列的互补序列存在变异；和/或第2引物对中的至少1个引物中相对于阳性对照基因序列的互补序列存在变异。

9.根据权利要求7或8所述的引物组，变异为核苷酸在第1引物对或者第2引物对中的至少1个引物中的插入。

10.根据权利要求9所述的引物组，第1引物对为如下的一对引物：包含序列号1的序列的引物以及包含序列号3的序列的引物。

11.根据权利要求9或者10所述的引物组，第2引物对为如下的一对引物：包含序列号4的序列的引物以及包含序列号5的序列的引物。

12.一种微生物检测用PCR试剂盒，其包含权利要求7～11的任一项所述的引物组。