[发明专利]缀合方法

权利要求书

1.一种用于缀合细菌糖类的方法，其包括步骤

a）将所述细菌糖类与0.001-0.7、0.005-0.5、0.01-0.5、0.1-1.2、0.1-0.5、0.1-0.2、0.5-0.8、0.1-0.8、0.3-1.0或0.4-0.9摩尔当量的高碘酸盐反应，以形成活化的细菌糖类；

b）将所述活化的细菌糖类与载体蛋白质混合；

c）将所述活化的细菌糖类和所述载体蛋白质与还原剂反应，以形成缀合物；

或

a）将所述细菌糖类与0.001-0.7、0.005-0.5、0.01-0.5、0.1-1.2、0.1-0.5、0.1-0.2、0.5-0.8、0.1-0.8、0.3-1.0或0.4-0.9摩尔当量的高碘酸盐反应，以形成活化的细菌糖类；

b）将所述活化的细菌糖类与接头混合；

c'）使用还原剂将所述活化的细菌糖类与所述接头反应，以形成细菌糖类-接头；

d）将所述细菌糖类-接头与载体蛋白质反应，以形成缀合物；

其中步骤a）在不含胺基团的缓冲液中发生，并且所述缓冲液具有1-100mM的浓度。

2.权利要求1的方法，其中所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液和柠檬酸盐缓冲液。

3.权利要求1-2中任一项的方法，其中所述缓冲液是无机缓冲液。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述缓冲液是磷酸盐缓冲液。

5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述缓冲液具有1-50mM、1-25mM、1-10mM、5-15mM、8-12mM、或10-50mM或约10mM的浓度。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述步骤a）中的pH是pH 3.5-8.0、5.0-7.0、或pH 5.5-6.5或约pH 6.0。

7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述细菌糖类包含细菌荚膜糖类。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述细菌糖类源于肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌、金黄色葡萄球菌、肠球菌、沙门氏菌Vi或表皮葡萄球菌。

9.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述细菌糖类选自1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F和33F的肺炎链球菌荚膜糖类。

10.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述细菌糖类选自5、6B、6A、7F、9V、14、19F或23F。

11.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述细菌糖类是肺炎链球菌荚膜糖类23F。

12.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述细菌糖类是肺炎链球菌荚膜糖类6B。

13.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述细菌糖类是肺炎链球菌荚膜糖类6A。

14.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述细菌糖类是流感嗜血杆菌b（Hib）多糖或寡糖。

15.权利要求1-14中任一项的方法，其中所述细菌糖类含有邻位二醇。

16.权利要求1-15中任一项的方法，其中所述细菌糖类是天然多糖，或在大小中减少不超过x20倍（例如通过微流化）。

17.权利要求1-16中任一项的方法，其中在步骤a）前，所述细菌糖类是微流化的。

18.权利要求16-17中任一项的方法，其中所述天然多糖的平均分子量是20kDa - 2000kDa或30kDa - 1000kDa。

19.权利要求18的方法，其中所述天然多糖的平均分子量是750-1500 kDa。

20.权利要求18的方法，其中所述天然多糖的平均分子量是100 - 250 kDa。

21.权利要求1-20中任一项的方法，其中在步骤a）前，所述细菌糖类的平均分子量是1-1100kDa、100-470kDa、200-300kDa、600-1100kDa或800-1000kDa。