[发明专利]维生素D化合物的释放制剂

说明书

技术领域

本发明涉及用于释放与维生素D-结合蛋白结合的维生素D化合物的试剂组合物(reagent composition)，用于检测维生素D化合物的体外方法，其中通过使用该试剂组合物，使得所述维生素D化合物从维生素D-结合蛋白释放，且还涉及以该方式获得的试剂混合物。本发明还涉及所披露的用于释放维生素D化合物的试剂组合物的用途以及用于检测维生素D化合物的试剂盒，其含有除常见检测试剂之外的用于释放维生素D化合物的试剂组合物。

背景技术

维生素D的充分供给是极其重要的，如术语“维他命(vitamin)”早已暗示的那样。维生素D的缺乏导致严重的疾病诸如佝偻病或者骨质疏松。虽然在上个世纪的早期，维生素D仍然被看作一种单一物质，但是在过去的几十年内，维生素D系统已经变为一种维生素D代谢产物的复杂且多样的网络。如今，40种以上的不同的维生素D代谢产物是已知的(Zerwekh,J.E.,Ann.Clin.Biochem.41(2004)272-281)。

人类只能通过来自阳光的紫外线作用于皮肤上而产生D₃维生素或者维生素D₂(calciferols)。在血液中，维生素D₃结合到所谓的维生素D-结合蛋白，并将其输送到肝脏中，在此通过25-羟基化作用将其转化为25-羟基维生素D₃。除皮肤和肝脏之外，许多其它组织目前已知涉及维生素D新陈代谢，而上述两个器官早已在下述文献中提及(Schmidt-Gayk,H.et al.(eds.),“Calcium regulating hormones,vitamin D metabolites and cyclic AMP”,SpringerVerlag,Heidelberg(1990)pp.24-47)。25-羟基维生素D，更具体地说，25-羟基维生素D₂和25-羟基维生素D₃，就其数量而言，是人有机体中的重要存储形式。当需要时，这些前体可以在肾中转化而形成生物活性的1α，25-二羟基维生素D，所谓的D激素。生物活性的维生素D调节从肠的钙摄取、骨矿化，并且影响许多其它代谢途径诸如胰岛素体系。

测量维生素D水平本身是没有多少益处的，当测定患者的维生素D状况时，因为取决于食物摄取或者暴露于阳光，维生素D(维生素D₂和维生素D₃)的浓度变化很大。另外，在循环(24小时)中维生素D具有较短的生物半衰期，因此出于这种原因也不是合适的测定患者的维生素D状况的参数。同样也适用于生理活性形式的维生素D(1，25-二羟基维生素D)。相比于25-羟基维生素D而言，这些生物活性形式同样以较小的且较大波动的浓度存在。由于全部这些原因，特别地，25-羟基维生素D的量化是一种合适的全面分析患者的总的维生素D状况的手段。

维生素D代谢产物如25-羟基维生素D以高亲和性由维生素D-结合蛋白结合且也以受限的程度与白蛋白和一些脂蛋白结合。在正常情况下适于从维生素D-结合蛋白释放维生素D代谢产物的方法相比于从任何其它蛋白释放维生素D代谢产物而言将是非常适当的。

25-羟基维生素D或者其它维生素D化合物对维生素D-结合蛋白的结合使得维生素D化合物的确定极大地复杂化。全部已知的方法要求待分析的维生素D化合物从其与维生素D-结合蛋白形成的复合物中释放或者分离。在下文中，为了简化的目的，这被称为从维生素D-结合蛋白中释放维生素D化合物，虽然当然其只能从维生素D化合物和维生素D-结合蛋白的复合物中，而不是单独地从维生素D-结合蛋白中被释放。

维生素D-结合蛋白在酸性pH条件下为未折叠的，但在pH重新变为中性条件时，其具有正确重折叠且重新结合分析物的高趋势。因此，通常需要首先释放维生素D化合物，然后将所述维生素D-结合蛋白与待分析的维生素D化合物分离。

由于25-羟基维生素D的高的临床价值，许多方法从文献中是已知的，这使得25-羟基维生素D可以或多或少被可靠地确定。

Haddad,J.G. et al.,J.Clin.Endocrinol.Metab.33(1971)992-995，和Eisman,J.A.et al.,Anal.Biochem.80(1977)298-305例如描述了使用高效液相色谱(HPLC)确定血液样品中25-羟基维生素D的浓度。