[发明专利]western印迹分析技术

权利要求书

1.一种进行Western印迹分析技术的方法，其中，所述方法按以下顺序执行：

a).预染色样品中的蛋白质；

b).使用凝胶电泳分离所述蛋白质；

c).分析所分离的蛋白质以确定总蛋白质含量和/或至少一个持家蛋白质含量；

d).将所述蛋白质转移到至少一个膜上；

e).探测所分离的蛋白质以检测靶蛋白质；以及

f).分析所探测的蛋白质以确定所述靶蛋白质的含量或者分子量和含量，

其中，将所述总蛋白质含量和/或持家蛋白质含量与所述靶蛋白质含量比较，以获得总蛋白质和/或持家蛋白质含量相对靶蛋白质含量的比率。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述蛋白质含量被计算为相对于电泳凝胶中的荧光的位置而绘制或相对于从蛋白质分离开始的固定点处检测到所述荧光的时间而绘制的荧光强度曲线下方的面积。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述总蛋白质含量被确定为相对于电泳凝胶中的荧光的位置而绘制或相对于从蛋白质分离开始的固定点处检测到所述荧光的时间绘制的荧光强度曲线下方的全部面积。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述靶蛋白质含量和/或持家蛋白质含量被确定为在相对于电泳凝胶中的荧光的位置而绘制或相对于从蛋白质分离开始的固定点处检测到所述荧光的时间而绘制的荧光强度曲线上的特定峰值下的面积。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，靶蛋白质的浓度是用下述方式计算的：使用已知蛋白质浓度的含量来建立校准曲线，并将所述靶蛋白质含量绘图到所述校准曲线上。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，执行所述靶蛋白质的系列稀释以提高确定靶蛋白质浓度的计算的精确度。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述总蛋白质含量和/或持家蛋白质含量用作含量对照。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，将所述总蛋白质含量和/或持家蛋白质含量用作含量对照，并使用这些数值来归一化所述总蛋白质含量和/或持家蛋白质含量相对于靶蛋白质含量的比率。

9.根据权利要求1所述的方法，其中，使用至少一个荧光基团将所述样品中的所述蛋白质预染色。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，使用多于一个荧光基团，各荧光基团在不同波长处激发和发射，使得在分析期间可单独地识别各荧光基团。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述总蛋白质和/或持家蛋白质与荧光基团相关，所述靶蛋白质与下述荧光基团相关：该荧光基团相对于与所述总蛋白质和/或持家蛋白质相关的荧光基团而言在不同波长处激发和发射。

12.根据权利要求1所述的方法，其中，分析所分离的蛋白质以确定总蛋白质含量的步骤包括：捕获所分离的蛋白质的图像。

13.根据权利要求1所述的方法，其中，分析所探测的蛋白质以确定靶蛋白质含量的步骤包括：捕获所探测的蛋白质的图像。

14.根据权利要求1所述的方法，其中，分析所分离的蛋白质以确定所述总蛋白质含量和/或持家蛋白质含量和/或分析所探测的蛋白质以确定所述靶蛋白质含量的步骤包括：使用软件分析技术来处理分析数据。

15.根据权利要求1所述的方法，其中，分析所分离的蛋白质以确定所述总蛋白质含量和/或持家蛋白质含量以及分析所探测的蛋白质以确定所述靶蛋白质含量的步骤是在单个分析设备上执行的。

16.根据权利要求1所述的方法，其中，使用可编程的计算机来控制在凝胶电泳期间使用的电压和时间。

17.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤b)期间添加通道标记物，来帮助绘制所分离的蛋白质的分析结果和所探测的蛋白质的分析结果。

18.根据权利要求1所述的方法，其中，使用分子量定径标记物来帮助绘制所分离的蛋白质的分析结果和所探测的蛋白质的分析结果。

19.根据权利要求1所述的方法，其中，分析所分离的蛋白质以确定所述总蛋白质含量和/或持家蛋白质含量和/或分析所探测的蛋白质以确定所述靶蛋白质含量的步骤包括：通过参考存储的信息来辨识所述样品。