[发明专利]用于检测腈相关酶的酶活性的荧光底物

权利要求书

1.一种检测受试物的酶活性的方法，其包含以下工序，

(a)使受试物与通过腈相关酶的作用而荧光发生变化的化合物反应的工序，和

(b)对由工序(a)中的反应而产生的荧光的波长和强度进行测定的工序。

2.根据权利要求1所述的方法，酶活性为选自由腈水解酶、腈水合酶和酰胺酶所组成组中的一种酶的活性。

3.根据权利要求1所述的方法，通过腈相关酶的作用而荧光发生变化的化合物为下述式(I)表示的化合物、其盐或它们的水合物，

式中，R¹表示-CN、-CONH₂、-CH=CH-CN或-CH=CH-CONH₂，R²表示C_1-4烷基，R³和R⁴各自独立地表示氢原子、卤原子或C_1-4烷基，R⁵表示氢原子、C_1-4烷基羰基或C_1-4烷基羰基氧基甲基。

4.根据权利要求3所述的方法，R¹为-CN或-CH=CH-CN，腈相关酶为腈水解酶或腈水合酶。

5.根据权利要求3所述的方法，R¹为-CONH₂或-CH=CH-CONH₂，腈相关酶为酰胺酶。

6.根据权利要求1所述的方法，荧光使用流式细胞术测定。

7.一种下述式(I)表示的化合物、其盐或它们的水合物，

式中，R¹表示-CN、-CONH₂、-CH=CH-CN或-CH=CH-CONH₂，R²表示C _1-4烷基，R³和R⁴各自独立地表示氢原子、卤原子或C_1-4烷基，R⁵表示氢原子、C_1-4烷基羰基或C_1-4烷基羰基氧基甲基。

8.一种用于检测腈相关酶的酶活性的荧光底物，其含有权利要求7所述的化合物、其盐或它们的水合物。

9.根据权利要求8所述的底物，腈相关酶为选自由腈水解酶、腈水合酶和酰胺酶所组成组中的至少一种。

10.根据权利要求8所述的底物，R¹为-CN或-CH=CH-CN，腈相关酶为腈水解酶或腈水合酶。

11.根据权利要求8所述的底物，R¹为-CONH₂或-CH=CH-CONH₂，腈相关酶为酰胺酶。

12.一种用于检测腈相关酶的酶活性的试剂盒，其含有权利要求8～11中的任一项所述的底物。