[发明专利]方法

权利要求书

1.修饰包含至少两个赖氨酸残基的多肽中特定赖氨酸残基的方法，所述方法包括：

(a)提供一种多肽，所述多肽包含受第一保护基团保护的目标赖氨酸残基和至少一个另外的赖氨酸残基；

(b)处理所述多肽以保护所述另外的赖氨酸残基，其中，所述另外的赖氨酸残基的保护基团与所述目标赖氨酸残基的保护基团不同；

(c)选择性地去保护所述目标赖氨酸残基；和

(d)修饰(c)中所述的去保护了的赖氨酸残基。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述多肽的产生包括：

(i)提供编码所述多肽的核酸，其中所述核酸包含编码所述目标赖氨酸的正交密码子；

(ii)在正交tRNA合成酶/tRNA对存在下翻译所述核酸，其中所述正交tRNA合成酶/tRNA对能够识别所述正交密码子并将受第一保护基团保护的所述目标赖氨酸残基引入至所述多肽链中。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述正交密码子包括TAG，所述tRNA包括MbtRNA_CUA，所述tRNA合成酶包括MbPylRS。

4.如前述任一项权利要求所述的方法，其中，受第一保护基团保护的所述目标赖氨酸残基是Nε-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸。

5.如前述任一项权利要求所述的方法，其中，所述另外的赖氨酸残基的保护基团是N-(苄氧基羰基氧基)琥珀酰亚胺(Cbz-Osu)。

6.如前述任一项权利要求所述的方法，其中，步骤(b)包括在碱性DMSO中用N-(苄氧基羰基氧基)琥珀酰亚胺(Cbz-Osu)处理所述多肽。

7.如前述任一项权利要求所述的方法，其中，步骤(c)包括用含三氟乙酸(TFA)的水处理所述多肽。

8.如前述任一项权利要求所述的方法，其中，步骤(d)的修饰包括：

(i)通过在Ag(I)存在下转换成N-羟基琥珀酰亚胺酯而活化硫酯；

(ii)添加将与所述目标赖氨酸连接的多肽；和

(iii)温育以形成特异的异肽键。

9.如前述任一项权利要求所述的方法，其中，步骤(d)的修饰在所述目标赖氨酸残基的ε-氨基基团上进行。

10.如前述任一项权利要求所述的方法，其中，在步骤(d)中对所述目标赖氨酸进行多个修饰。

11.如前述任一项权利要求所述的方法，进一步包括使所述另外的赖氨酸残基去保护的步骤(e)。

12.如权利要求11所述的方法，其中，步骤(e)包括用比例为1:3:6的三氟甲磺酸(TFMSA):三氟乙酸(TFA):二甲基硫醚(DMS)的混合物处理所述多肽。

如权利要求1所述的方法，其中，步骤(a)包括通过在所述多肽的翻译过程中通过基因工程方式向所述多肽链中引入受第一保护基团保护的所述目标赖氨酸残基而产生所述多肽。

13.如前述任一项权利要求所述的方法，其中，所述多肽为泛素。

14.如前述任一项权利要求所述的方法，其中，步骤(d)的修饰是另外的多肽链与所述目标赖氨酸的共价连接。

15.如权利要求14所述的方法，其中，所述另外的多肽链为泛素。

16.如权利要求10所述的方法，其中，重复步骤(c)-(d)以生产由通过赖氨酸残基的共价连接而连接的多肽链。

17.如前述任一项权利要求生产的多肽。

18.如权利要求17所述的多肽，其包括K-连接的泛素链。

19.如权利要求18的多肽，其中，所述K-连接是K6或K29连接。

20.TRABID作为K29去泛素化酶的应用。

21.切割K29连接的泛素的方法，所述方法包括使K29连接的泛素与TRABID接触。