[发明专利]改变细胞分化状态的方法及其组合物

权利要求书

1.使目标或受体细胞程序重排、分化、转分化或去分化成为不同细胞类型的细胞或者多潜能细胞或分化程度较低的细胞的方法，所述方法通过将一种或多种核酸构建物或其表达产物引入所述细胞，和在使所述细胞转化成为多潜能细胞或相应于内胚层、中胚层或外胚层的细胞系的细胞的培养条件下进行培养而实现。

2.权利要求1所述的方法，其中所述构建物编码表达盒，所述表达盒包括处于可操作连接中的：

i）至少一种蛋白质标记；

ii）蛋白质转导结构域；

iii）融合结构域；

iv）核定位信号；和

v）至少一种转录因子。

3.权利要求2所述的方法，其中所述转录因子是核程序重排因子。

4.权利要求3所述的方法，其中所述转录因子由选自以下的基因编码：SOX家族基因、KLF家族基因、MYC家族基因、SALL4、OCT4、NANOG、LIN28或其组合。

5.权利要求4所述的方法，其中所述转录因子是Oct4、Sox2、Klf4、Nanog或c-Myc。

6.权利要求2所述的方法，其中所述转录因子由选自以下的基因编码：OCT4、NANOG、SOX2、SOX17、HNF4、GATA4、HHEX、CEBPβ、CEBPδ、PRDM16、MYOD1、NKX2.5、MEF2c、MYOCARDIN、RUNX2、PDX、NGN、SALL4或SOX9。

7.权利要求6所述的方法，其中所述转录因子是Oct4、Nanog、Sox2、Sox9、Sox17、HNF4α2、HNF4α4、HNF4α7、HNF4α8、HNF4γ、GATA4、Hhex、CEBPβ、CEBPδ、PRDM16、MyoD1、NKX2.5、Mef2c、心肌素、Runx2-I、Pdx1、Ngn3、Sall4或Runx2-II。

8.权利要求1所述的方法，其中所述细胞在所述核酸构建物或其产物被引入所述细胞前是未分化、部分分化或完全分化的。

9.权利要求1所述的方法，其中所述细胞是胚胎干（ES）细胞、多潜能干（PS）细胞、诱导多潜能干（iPS）细胞、单性生殖干细胞、间充质干细胞、中胚层干细胞、内胚层干细胞、外胚层干细胞、多能性干细胞、双能干细胞、体干细胞或体细胞。

10.权利要求9所述的方法，其中所述内胚层干细胞表达选自FoxA2、Sox17、CXCR4、短尾（brachyury）和CER1的一种或多种标记物。

11.权利要求10所述的方法，其中所述内胚层干细胞是肝细胞、胆管细胞、胰腺外分泌或内分泌β-细胞，或所述中胚层干细胞是脂肪细胞、软骨细胞、骨细胞或肌细胞。

12.权利要求1所述的方法，其中所述细胞在一种或多种成熟因子的存在下被培养。

13.权利要求2所述的方法，其中所述核酸构建物包含至少两种蛋白质标记。

14.权利要求2所述的方法，其中所述核酸构建物包含三种或更多种蛋白质标记。

15.权利要求13所述的方法，其中所述至少两种蛋白质标记包括亲和标记和表位标记。

16.权利要求13所述的方法，其中所述至少两种蛋白质标记包括聚(His)标记和血细胞凝集素（HA）表位标记。

17.权利要求1所述的方法，其中所述至少一种蛋白质标记选自聚(His)、血细胞凝集素（HA）表位、myc表位、几丁质结合蛋白（CBP）、麦芽糖结合蛋白（MBP）、谷胱甘肽-S-转移酶（GST）、钙调蛋白结合肽、生物素羧基载体蛋白（BCCP）、FLAG八肽、nus、绿色荧光蛋白（GFP）、硫氧还蛋白（TRX）、聚(NANP)、V5、S-蛋白、链霉抗生物素蛋白、SBP、聚(Arg)、DsbA、c-myc-标记、HAT、纤维素结合结构域、softag1、softag3、小泛蛋白样改造剂（SUMO）和泛蛋白（Ub）。

18.权利要求2所述的方法，其中所述融合结构域包括流感血凝素融合肽或其片段。

19.权利要求2所述的方法，其中所述蛋白质转导结构域包括TAT蛋白、VP22蛋白、果蝇触角足（Antp）同源异型转录因子或其片段。