[发明专利]非糖基化重组人G-CSF的长期贮藏

权利要求书

1.用于非糖基化重组人G-CSF的稳定长期贮藏的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)提供包含非糖基化重组人G-CSF和山梨糖醇的水性乙酸盐或谷氨酸盐缓冲的G-CSF组合物；

(b)将步骤(a)中提供的G-CSF-制剂冷却至-15℃或更低的温度以获得冷冻G-CSF制剂；

(c)将步骤(b)中获得的所述G-CSF-制剂贮藏于所述冷冻状态下；

(d)将步骤(c)的所述冷冻G-CSF组合物的温度经历一段时间升至2℃-8℃范围的温度，所述时间被调整以使所述组合物融化并获得液体组合物，所述液体组合物的G-CSF含量为步骤(a)中提供的组合物的G-CSF含量的至少95％。

2.权利要求1的方法，其中步骤(a)的缓冲的G-CSF-制剂中G-CSF的量在0.1mg/ml至8.0mg/ml的范围，优选0.25mg/ml至6.5mg/ml的范围。

3.权利要求1或权利要求2的方法，其中所述缓冲的G-CSF组合物的pH为3.5至5，优选3.7至4.8。

4.权利要求1至3任一项的方法，其中所述缓冲的G-CSF组合物的乙酸盐或谷氨酸盐浓度在0.5mM至100mM的范围，优选2mM至80mM的范围。

5.权利要求1至4任一项的方法，其中所述G-CSF组合物中山梨糖醇的量在10至100mg/ml的范围，优选25至75mg/ml的范围。

6.权利要求1至5任一项的方法，其中步骤(a)中提供的水性乙酸盐或谷氨酸盐缓冲的G-CSF组合物的体积为0.1ml至8L，优选为5ml至4L，更优选为100ml至1.5L。

7.权利要求1至6任一项的方法，其中将步骤(b)中的G-CSF组合物冷却至-15℃至-25℃的温度或-60℃至-80℃的温度。

8.权利要求1至7任一项的方法，其中将步骤(c)中的冷冻的G-CSF组合物贮藏至少两天的时间，优选至少一个月的时间，更优选至少三个月的时间。

9.权利要求1至8任一项的方法，其中所述冷冻G-CSF组合物的温度升至步骤(d)中2℃至8℃范围的温度是通过经过至少6小时时间逐渐或线性地升高温度实现的。

10.权利要求1至8任一项的方法，其中所述冷冻G-CSF组合物的温度升至步骤(d)中的温度是通过将冷冻组合物转移至2℃-8℃范围的温度并将组合物在所述温度保持至少12小时、优选至少24小时、更优选至少36小时的时间实现的。

11.权利要求1至10任一项的方法，其中所述G-CSF组合物不含表面活性剂。

12.权利要求1至10任一项的方法，其中所述G-CSF组合物包含表面活性剂。

13.提供非糖基化重组人G-CSF的药物组合物的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)用乙酸盐或谷氨酸盐缓冲液和山梨糖醇配制非糖基化重组人G-CSF以获得水性缓冲G-CSF组合物；

(b)将步骤(a)的所述G-CSF组合物冷却至-15℃或更低的温度以获得冷冻G-CSF组合物；

(c)将步骤(b)中获得的所述G-CSF组合物贮藏于所述冷冻状态下；

(d)将步骤(c)的所述冷冻G-CSF组合物的温度经历一段时间升至2℃至8℃范围的温度，所述时间被调整以使所述组合物融化并获得液体组合物，所述液体组合物的G-CSF含量为步骤(a)中提供的组合物的G-CSF含量的至少95％；以及

(e)将步骤(d)中获得的液体组合物灌装至用于胃肠外用途的初级包装中。