[发明专利]作为抗病毒剂的乳凝集素源性肽

说明书

描述

本发明涉及单体和多聚肽化合物，所述肽化合物具有抗病毒活性，特别是针对利用整合素的病毒，更特别是针对轮状病毒。本发明进一步涉及包含用于医疗应用或用作食品添加剂的所述肽化合物的组合物。

乳是乳清、酪蛋白的悬浮液和脂肪球的乳液在不同阶段相互保持平衡的不均匀混合物。脂肪球通常为由双层包围的数滴甘油三酯，所述双层是典型的脂质双分子层，其来自脂肪球由此起源的乳腺上皮细胞的顶端质膜。与乳脂肪球的膜(乳脂肪球膜MFGM)相关的蛋白质执行的功能对新生儿和婴幼儿是重要的。

临床研究(Kurugol等，2003;Newburg等,1998;Morrow等，2004)表明不完全母乳喂养的婴幼儿有两次由于轮状病毒而发展胃肠炎的风险。按照新生儿或婴幼儿的营养需求，喂养这些孩子各种类型的制备品(preparation)。在大多数情况下，这些配制品来自用蔬菜起源的必需脂肪进行强化的脱脂牛乳。因此从这类制备品中排除了与乳脂肪球的膜(MFGM)相关的所有蛋白质。以前的研究，也是美国专利No.5,667,797的课题，显示存在于人MFGM的生物化学化合物具有一些抗轮状病毒活性。具体地，基本上不含其脂质部分的乳脂肪球膜对抗轮状病毒感染具有活性，而从牛MFGM分离的那些相同的分子并未显示出这种功能。研究同样显示纯化的人乳凝集素对轮状病毒感染具有活性，而牛乳凝集素不具有这种活性(Kvistgaard等，2004)。

乳凝集素是存在于MFGM中的糖蛋白，可能通过与组成性磷脂相互作用而与膜相关。从不同的动物物种中分离的不同乳凝集素特征在于有若干结构域：在N端区，这些类似于表皮生长因子，并且朝向C端，它们是凝血因子V和VIII的同系物。牛乳凝集素包含427个氨基酸残基，其包括18个氨基酸的N端信号序列，其在细胞内加工过程中被裂解。无信号序列的理论分子量是约45.6KDa，并且等电点是6.63。人乳凝集素是387个氨基酸的蛋白质，包括23个氨基酸的N端信号序列。无信号序列的理论分子量是约40.8KDa，等电点是8.22。通过二维电泳(2DE)分离时，这两种蛋白质显示大于理论值的表观分子量：存在重量差异被解释为由于糖基化的存在。

轮状病毒是一种裸RNA病毒，其对于通过口腔和排泄物途径传递的环境条件具有高耐受性。这种病毒的靶细胞是小肠绒毛的成熟顶端肠上皮细胞，由于感染，其随着绒毛的萎缩而死亡。这种由感染引起的组织损伤会导致肠黏膜严重的功能改变，如电解质的损失和水分吸收的减少，从而导致急性腹泻。

轮状病毒属于利用整合素作为细胞受体的病毒类型，即，轮状病毒与整合素相互作用以进行细胞附着和进入。Graham等(Journal ofVirology，2003年9月，第9969-9978页)公开了对参与整合素相互作用的病毒蛋白质和序列的研究，该整合素牵涉轮状细胞的附着和进入。特别是参考包含整合素配体序列DGE的病毒蛋白VP4，其参与利用整合素的轮状病毒的结合。对整合素配体肽DGEA和GPRP进行了研究。作者表明整合素配体肽可以剂量依赖性方式抑制猴轮状病毒SA11结合并感染MA104细胞。Zarate等(Journal of Virology,2004年10月,第10839-10847页)涉及对轮状病毒细胞的进入的研究，并且特别涉及对介导病毒感染性的整合素识别位点的确立。Zarate等将其研究集中于CNP肽，发现所述肽与整合素相互作用和轮状病毒的感染有关。

轮状病毒是导致五岁以下儿童的严重肠胃炎的最重要的原因。这种疾病正常情况下是自限性的并且无后遗症，但致命的后果也是可能的，伴有脱水和电解质失衡，这种现象主要发生在营养不良的儿童和很少有机会获得支持疗法的儿童中。目前没有特定的抗轮状病毒的药物，因此通过支持疗法治疗严重的胃肠炎，目的是恢复失去的液体和修正电解质和酸碱失衡。由于轮状病毒导致的伴有严重脱水的胃肠炎风险的主要人群是未满两岁儿童、营养不良和/或免疫缺陷的儿童和住院和/或在社区治疗的那些儿童。

在这种情况下，医疗和社会经济因素表明急切需要研发一种具有抗轮状病毒活性的基于人乳的组分的预防性和/或治疗性制备品。另一方面，由于实际和道德原因，不可能使用母乳。因此，本发明的目的是提供对人的轮状病毒感染表现有益效果的药学上有用的化合物和制备品。

尤其是由于牛乳便宜，且容易大量获得，已尝试使用牛乳或其组分。然而，来自牛乳的各组分不具有抗轮状病毒的活性，因此得出结论只有人乳具有抗轮状病毒活性(Kvistgaard，同上)。