[发明专利]用于胞内代谢物检测的传感器

权利要求书

1.细胞，就其野生型而言进行了遗传修饰且包含编码自发荧光蛋白的基因序列，其中所述自发荧光蛋白的表达依赖于特定代谢物的胞内浓度。

2.权利要求1的细胞，其中作为所述特定代谢物的胞内浓度的函数在转录水平实现所述编码自发荧光蛋白的基因序列的表达控制。

3.权利要求1或2的细胞，其中所述编码自发荧光蛋白的基因序列处于异源启动子的控制下，所述异源启动子在所述细胞的野生型中控制下述基因的表达，所述基因的表达在野生型细胞中的表达依赖于特定代谢物的胞内浓度。

4.权利要求3的细胞，其中作为所述特定代谢物的胞内浓度的函数在翻译水平实现所述编码自发荧光蛋白的基因序列的表达控制。

5.权利要求2或4的细胞，其中所述编码自发荧光蛋白的基因序列与DNA序列功能性连接，所述DNA序列在mRNA水平承担在转录水平或翻译水平调节所述编码自发荧光蛋白的基因序列的表达的核糖开关的功能。

6.前述权利要求中任一项的细胞，其中所述细胞是棒状杆菌属或埃希氏菌属细胞。

7.前述权利要求中任一项的细胞，其中所述代谢物选自氨基酸、核苷酸、脂肪酸和糖类。

8.权利要求7的细胞，其中所述代谢物是氨基酸。

9.权利要求8的细胞，其中所述氨基酸是L-赖氨酸。

10.权利要求2和6至9中任一项的细胞，其中所述启动子是lysE启动子，所述基因是lysE基因。

11.前述权利要求中任一项的细胞，其中所述自发荧光蛋白是绿色荧光蛋白(GFP)或此蛋白质的变体。

12.用于在细胞悬液中鉴定具有提高的特定代谢物的胞内浓度的细胞的方法，其包括方法步骤：

i)提供包含权利要求1至11中任一项的细胞的细胞悬液；

ii)遗传修饰所述细胞来获得细胞悬液，其中细胞就特定代谢物的胞内浓度而言不同；

iii)通过检测胞内荧光活性来鉴定所述细胞悬液中具有提高的此特定代谢物的胞内浓度的单个细胞。

13.权利要求12的方法，其中通过非定向诱变来进行方法步骤ii)中的遗传修饰。

14.权利要求12或13的方法，其进一步包括方法步骤：

iv)将鉴定出的细胞从所述细胞悬液分开。

15.权利要求14的方法，其中利用流式细胞术来进行所述分开。

16.用于产生就其野生型而言进行了遗传修饰的具有特定代谢物的优化产生的细胞的方法，其包括方法步骤：

I)提供包含权利要求1至11中任一项的细胞的细胞悬液；

II)遗传修饰所述细胞来获得细胞悬液，其中细胞就其特定代谢物的胞内浓度而言不同；

III)通过检测胞内荧光活性来鉴定所述细胞悬液中具有提高的特定代谢物的胞内浓度的单个细胞；

IV)将鉴定出的细胞从所述细胞悬液分开；

V)在鉴定出并分开的细胞中鉴定负责提高的特定代谢物的胞内浓度的那些遗传修饰基因G₁至G_n或突变M₁至M_m；

VI)产生就其野生型而言进行了遗传修饰的具有特定代谢物的优化产生的细胞，其基因组包含基因G₁至G_n中的至少一个和/或突变M₁至M_m中的至少一个。

17.权利要求16的方法，其中通过非定向诱变来进行方法步骤II)中的遗传修饰。

18.细胞，其通过权利要求16或17的方法获得。

19.用于产生代谢物的方法，其包括方法步骤：

(a)通过权利要求16或17的方法来产生就其野生型而言进行了遗传修饰的具有特定代谢物的优化产生的细胞；

(b)在细胞从营养物产生所述特定代谢物的条件下在包含所述营养物的培养基中培养所述细胞。

20.权利要求19的方法，其中所述代谢物选自氨基酸、核苷酸、脂肪酸和糖类。

21.权利要求20的方法，其中所述代谢物是氨基酸。