[发明专利]核糖核酸内切酶组合物及其使用方法

权利要求书

1.一种变体Csy4核糖核酸内切酶，其包含与图6所示的氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中所述核糖核酸内切酶包含在His-29处的氨基酸取代，其中在缺乏咪唑时，所述变体Csy4核糖核酸内切酶无酶活性，以及其中在咪唑存在下，所述变体Csy4核糖核酸内切酶可活化。

2.根据权利要求1所述的变体Csy4核糖核酸内切酶，其中所述氨基酸取代是His29至Ala29取代。

3.根据权利要求1所述的变体Csy4核糖核酸内切酶，其中所述变体Csy4核糖核酸内切酶包含提供可检测信号的部分。

4.根据权利要求1所述的变体Csy4核糖核酸内切酶，其中所述提供可检测信号的部分是荧光团、量子点、除所述核糖核酸内切酶之外的酶或者纳米粒子。

5.根据权利要求1所述的变体Csy4核糖核酸内切酶，其中所述核糖核酸内切酶被固定在不溶性支撑物上。

6.根据权利要求5所述的变体Csy4核糖核酸内切酶，其中所述不溶性支撑物是小珠。

7.根据权利要求1所述的变体Csy4核糖核酸内切酶，其中所述变体Csy4核糖核酸内切酶结合包含核苷酸序列5′-GUUCACUGCCGUAUAGGCAGCUAAGAAA-3′(SEQ ID NO：1)的RNA底物。

8.一种包含编码根据权利要求1所述的变体Csy4核糖核酸内切酶的核苷酸序列的核酸。

9.一种包含编码根据权利要求1所述的变体Csy4核糖核酸内切酶的核苷酸序列的重组表达载体。

10.根据权利要求9所述的重组表达载体，其中编码所述变体Csy4核糖核酸内切酶的所述核苷酸序列可操作连接至启动子。

11.根据权利要求10所述的重组表达载体，其中所述启动子是诱导型启动子。

12.一种包含根据权利要求9所述的重组表达载体的体外遗传修饰的宿主细胞。

13.一种用于纯化核酸的混合群中存在的靶RNA的试剂盒，所述试剂盒包含：

根据权利要求1所述的变体Csy4核糖核酸内切酶。

14.根据权利要求13所述的试剂盒，进一步包含重组表达载体，所述重组表达载体以5′至3′的顺序和可操作连接包含：

a)编码由根据权利要求1所述的变体Csy4核糖核酸内切酶特异性结合的RNA底物的核苷酸序列；

b)适合插入编码所述靶RNA的核酸的多克隆位点。

15.根据权利要求14所述的试剂盒，其中编码所述RNA底物的所述核苷酸序列可操作连接至启动子。

16.根据权利要求15所述的试剂盒，其中所述启动子是诱导型启动子。

17.根据权利要求14所述的试剂盒，其中所述RNA底物包含核苷酸序列5′-GUUCACUGCCGUAUAGGCAGCUAAGAAA-3′(SEQ ID NO：1)。

18.根据权利要求14所述的试剂盒，其中所述重组表达载体包含编码所述靶RNA的核苷酸序列，所述核苷酸序列插入所述多克隆位点。

19.根据权利要求13所述的试剂盒，进一步包含咪唑。

20.根据权利要求13所述的试剂盒，进一步包含一种或多种洗涤缓冲剂。

21.根据权利要求13所述的试剂盒，进一步包含阳性对照表达载体。

22.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述变体Csy4核糖核酸内切酶被固定在不溶性支撑物上。