[发明专利]军团杆菌测试

说明书

本发明涉及一种对水中或是水溶液中的军团杆菌进行定性和/定量测定的设备和方法。

军团杆菌是军团杆菌科中的一类杆状细菌。它们寄居于水中，是革兰氏阴性的、非孢子形成的细菌，由于它们具有一个或多个极性或亚极性的鞭毛而可以移动。所有的军团杆菌被认为是人类潜在的病原。目前，已知的品种超过48种和血清型70种。对于人类疾病来说最重要的病原是嗜肺军团杆菌，它被认为是军团杆菌疾病的病原体。军团杆菌能够产生于淡水中和盐水中，最佳的生存条件是在25℃-50℃的温度范围内。例如，它们频繁地产生于设备中，例如热水发电和配电系统、游泳池、空调系统中的空气净化器、冷却塔、朽木支架（deadlegs）、水箱和类似处。特别是它们可以产生于热水管，或者是通过外部加热作用的冷水管，它们在很长的时间内不会被用到。可能是这些例子，例如，在宾馆、医院的不规范房间使用，或者是其它公共场所，例如学校。军团杆菌的另一个栖息地是生物膜，即由薄的粘液层组成的膜，例如在其内的微生物诸如细菌、真菌或原生动物能够嵌入，以及频繁出现在潮湿的房间或者是在水表面和固体表面之间的接触面，例如水管。

军团杆菌传播至活的生物体，例如人类，理论上是可能的，通过接触自来水或空气传染如果军团杆菌到达肺深部。然而，并不是每种与含军团杆菌的水的接触都会导致健康危险。只有当含细菌的水以喷雾的形式被吸入才会导致疾病，例如，在洗澡期间、经由空调系统，经由草坪洒水器或在漩涡中心吸入被污染的水。

在德意志联邦共和国，在德国抗感染保护法(Infektionsschutzgesetz)第七章的影响下，一个由军团杆菌导致的急性感染的直接或间接检测必须通过诊断实验室汇报。自从2001年以来，这种必须呈报的疾病已经被记载于柏林的罗伯特·科赫研究所。在2004年，475件被报道的军团杆菌病的实例被登记在这个研究所。出于美国退伍军人协会会员的疾病的事件逐渐被人们所知，以前身体健康的人大概有15%的案例致命于这种疾病，有免疫缺陷以及先前有心脏/肺部疾病的人致命案例高达70%。2010年1月在德国和全球最大一次军团杆菌流行病的大爆发发生起始于乌尔姆地区，有5人死亡和64人被感染，且引起这种流行病的来源要追溯到靠近乌尔姆中央车站的一个热电联产电厂的冷水塔。

根据德国燃气和水技术科学协会(DVGW;Deutscher Verein des Gas-undWasserfaches e.V.)工作表W551的说明，饮用水含有100CFU(菌落形成单位)/100ml被认为受到了低感染风险的污染。也就是数值从＞10,000CFU/100ml开始就必须采取行动，必须立即采取措施，例如，供给网络的消毒和暂时禁止使用的要求。此外，2001年德国饮用水条例规定所有可能被军团杆菌污染的公共建筑，例如学校、幼儿园、医院、餐馆和其它公共设备，当地公共卫生部门必须经常检查。如果有必要，住宅建筑和工业厂房也可以包括在这种监控内。因此，一个前提是遵守德国饮用水条例中的化学和物理技术参数的惯例和考虑到技能的一般公认的规则，特别是，各种DIN条例，VDE指导方针6023和DVGW的工作表W551和W553。

Yanez M.A.等人在“使用免疫磁性净化和dotA基因的实时PCR扩增来对水样品中的嗜肺军团杆菌进行定量检测”，应用与环境微生物学，V0l.71,No.7,07,pages3434–3436，中描述了一种使用免疫磁性净化和点A基因的实时PCR扩增来对水样品中的嗜肺军团杆菌定量检测的方法。Füchslin等人在“使用免疫磁性分离和流式细胞仪对嗜肺军团杆菌进行快速定量测定”，血细胞计数A部分,77A,03/2010,pages264–274中描述了一种借助免疫磁性分离和流式细胞仪的结合对水样品中的嗜肺军团杆菌定量测定的方法。

到目前，现有技术在具有军团杆菌测试资格的商业实验室或是公共卫生部门提供现场取样和检测。使用这些方法不能被分析成无问题，大部分的水可以被测试，自2001年以来该条例的规定有效。此外，这些测试必须由经过适当训练的合格人员实施，且这些测试通常时间长且也相当的昂贵。

因此，本发明的目的在于提供一种设备和一种方法，使用该设备和方法能够在没有专业人员的参与的情况下，廉价且快速地现场测试有军团杆菌的污染物。

关于该设备，通过权利要求1中的主题实现这个目的，关于该方法，通过权利要求10中的方法实现这个目的。本发明的实施例能够在从属权利要求和后面的描述中找到。