[发明专利]靶向VEGFA的siRNA及用于体内治疗的方法

说明书

相关申请的交叉参考

本申请要求2010年7月28日申请的美国临时申请系列号61/368,385的权益，其全文引入本文作参考。

发明领域

本发明涉及siRNA的应用。

发明背景

血管生成是一个生理学过程，包括新血管的生长。这个过程的一个重要部分是产生血管内皮生长因子(VEGF或VEGFA)，其是由细胞产生的一种化学信号，刺激新血管的生长。

当VEGFA由细胞分泌并结合一或多个关联受体如跨膜蛋白质激酶VEGFRl/FLT-1和VEGFR2/FLK-1/KDR时起始该过程。在VEGFA结合跨膜蛋白质之后，起始信号级联，最终导致新血管形成。

血管生成可以是正常和关键的身体发育和调节的一部分。不幸地，其也可以与许多不希望的病症如视网膜病变、银屑病、癌症、渗出型老年性黄斑变性(ARMD)及类风湿性关节炎相关。在这些及其它情况中，存在高水平的VEGFA及伴随的血管化增加。因此，试图开发关注于控制VEGFA产生的治疗策略。

发明概述

本发明涉及抑制VEGFA表达的组合物和方法，以及与VEGFA过表达相关的病症的治疗。因此，本发明提供了抑制全部或部分VEGFA产生的试剂盒、siRNA以及导入siRNA的方法。

根据第一个实施方案，本发明提供了抑制VEGFA表达的方法。所述方法包括在体内(例如在人体内)给予生物体siRNA的方法，所述siRNA包含选自如下的序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86和88。

根据第二个实施方案，本发明提供了一种抑制VEGFA表达的方法。所述方法包括在体外给予siRNA，所述siRNA包含选自如下的序列：SEQ ID NOs:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86和88。

根据第三个实施方案，本发明提供了抑制VEGFA表达的方法。所述方法包括给予前两个实施方案的任一siRNA，其中所述siRNA具有一或多个如下修饰：有义链内所有C和U核苷酸以及有义链的前两个5’核苷酸的2’-O-烷基修饰(如2’-O-甲基修饰)，反义链内所有C和U核苷酸的2’氟修饰以及反义链位置1的核苷酸的5’磷酸化。在一些实施方案中，所述siRNA具有对有义链内所有C和U核苷酸的2’-O-烷基修饰以及对反义链的至少一个2’-O-烷基修饰。在一些实施方案中，所述siRNA具有一或多个1-6个核苷酸的突出端区。在一些实施方案中，存在所有前述修饰，以及仅那些修饰存在，因此除了位于有义链位置1和2的那些之外的所有G和A核苷酸均具有2’-OH基团。

根据第四个实施方案，本发明提供了抑制VEGFA表达的方法。所述方法包括给予前三个实施方案的任一siRNA，其中所述siRNA具有一或多个如下修饰：通过G5接头附着的胆固醇部分，及在有义链的位置6、13和19的一或多个位置的错配，其中有义链的长度为19个核苷酸，反义链的长度也为19个核苷酸(不包括突出端区)。有义链上的位置是从有义链的5’末端测量，其中有义链的第一个5’核苷酸被鉴别为最5’的核苷酸，其与反义链上的核苷酸碱基配对。正如此，通过这个定义，5’有义链突出端区核苷酸不包括在计数方案中。在一些这样的实施方案中，没有5’突出端区。在一些实施方案中，有一或两个1-6个碱基的3’突出端区或者没有突出端区。在一些实施方案中，在双链区内，除了位置6、13和19之外，有100%互补性。

根据第五个实施方案，本发明提供了至少两个siRNA的集合，所述siRNA选自SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86和88。

根据第六个实施方案，本发明提供了药物组合物，其包含治疗有效量的一或多个本文所述siRNA。