[发明专利]用于登革热检测的探针和引物

权利要求书

1.具有如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示的核苷酸序列的探针，可选地与可检测标签结合。

2.根据权利要求1所述的探针，其中，所述探针用于检测登革热感染；并且其中，所述可检测标签是在5'端的荧光团和在3'端的猝灭剂。

3.根据权利要求2所述的探针，其中，所述荧光团选自包含以下的组中：荧光素，由6-羧基荧光素[FAM]、VIC、JOE、5-(2'-氨基乙基)氨基萘-1-磺酸、香豆素和香豆素衍生物、荧光黄、得克萨斯红、四甲基罗丹明、四氯-6-羧基荧光素、5-羧基罗丹明和花青染料组成的荧光素衍生物，优选6-羧基荧光素[FAM]；并且所述猝灭剂选自包含以下的组中：四甲基罗丹明、4'-(4-二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸、4-二甲基氨基苯基偶氮苯基-4'-马来酰亚胺、四甲基罗丹明、羧基四甲基罗丹明和黑洞猝灭剂1[BHQ]染料，优选黑洞猝灭剂1（BHQ1）。

4.具有如SEQ ID No.3或SEQ ID No.4所示的核苷酸序列的引物。

5.根据权利要求4所述的引物，其中，具有SEQ ID No.3的所述引物是正义引物而具有SEQ ID No.4的所述引物是反义引物。

6.根据权利要求4所述的引物，其中，所述引物与具有SEQ ID No.1或SEQ ID No.2的探针相对应；并且其中，所述引物与任一具有SEQID No.1或SEQ ID No.2的所述探针组合使用。

7.一种用于检测登革热感染的PCR反应混合物，所述混合物包含核酸扩增试剂、具有选自包含SEQ ID No.1或SEQ ID No.2的组中的核苷酸序列的探针或其探针的组合；以及具有如SEQ ID No.3和SEQID No.4所示的核苷酸序列的引物。

8.根据权利要求7所述的反应混合物，其中，具有SEQ ID No.3的所述引物是正义引物而具有SEQ ID No.4的所述引物是反义引物；并且所述探针与在5'端具有荧光团和在3'端具有猝灭剂的可检测标签结合。

9.根据权利要求7所述的反应混合物，其中，所述引物与具有SEQ IDNo.1或SEQ ID No.2的探针相对应；并且其中所述引物与任一具有SEQ ID No.1或SEQ ID No.2的所述探针组合使用。

10.根据权利要求7所述的反应混合物，其中，所述登革热感染是从选自包含血液、血浆和血清或它们的任何组合的组中的样品中检出的；并且所述扩增试剂选自包含氯化镁、Taq聚合酶和缓冲液或它们的任何组合的组中。

11.一种检测和可选地量化登革热感染的方法，所述方法包括以下操作：

（a）获得包含核酸扩增试剂、选自包含SEQ ID No.1和SEQ IDNo.2的组中的探针、和具有如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的核苷酸序列的引物的PCR反应混合物；

（b）将检测样品引入至所述PCR反应混合物用于进行PCR扩增以获得目标序列的拷贝，接着检测产生的荧光信号以检测所述登革热感染；以及

（c）可选地，由所检测信号构建标准曲线用于定量所述登革热感染。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，具有SEQ ID No.3的所述引物是正义引物而具有SEQ ID No.4的所述引物是反义引物。

13.根据权利要求11所述的方法，其中，所述引物与具有SEQ ID No.1或SEQ ID No.2的探针相对应；并且其中所述引物与任一具有SEQID No.1或SEQ ID No.2的所述探针组合使用。

14.根据权利要求11所述的方法，其中，所述检测样品选自包含血液、血浆和血清或它们的任何组合的组中；并且所述扩增试剂选自包含氯化镁、Taq聚合酶和缓冲液或它们的任何组合的组中。

15.根据权利要求11所述的方法，其中，所述探针与在5'端具有荧光团和在3'端具有猝灭剂的可检测标签结合；并且所述荧光信号由在5'端具有荧光团和在3'端具有猝灭剂的所述探针产生。