[发明专利]用于登革热检测的探针和引物

说明书

技术领域

本公开涉及通过使用“寡核苷酸”探针用于检测和定量来自血液、血浆或血清样品的登革热病毒的方法。

背景技术

近几十年来，世界各地的登革热发病率急剧增长。约25亿人—世界人口的五分之二—现在处于来自于登革热的风险中。世界卫生组织（WHO）目前估计全球每年可能有50万登革热感染病例。仅在2007年，在美洲有超过890,000例报告的登革热病例，其中26000病例为登革出血热（DHF）。目前该病是在非洲、美洲、东地中海、东南亚和西太平洋地区的超过100个国家的地方病。东南亚和西太平洋地区受影响最严重。1970年之前，只有九个国家发生过登革出血热流行，到1995年这个数字增加了超过4倍。登革热是由蚊子传播的感染，近几十年来已成为主要的国际公共卫生关注点。登革热发生在世界各地的热带和亚热带地区，主要集中在城市化和半城市化地区。登革出血热（DHF），一种潜在的致命并发症，于20世纪50年代在菲律宾和泰国登革热流行期间被首次确认。现在，DHF影响到大多数亚洲国家并且已成为该地区儿童住院和死亡的首要原因。登革热病毒（DENV）是黄病毒科（Flaviviridae），黄病毒属的单链RNA（ssRNA）正链病毒。它也被称为登革热发烧（骨痛热，breakbone fever）。有四种不同、但却紧密相关的引起登革热的病毒。登革出血热（DHF）是一种潜在致命的并发症，其特征是高热，经常伴随肝脏肿大，并且严重的情况下发生循环衰竭。发病通常以突然发热并伴有脸部潮红以及其他流感样症状开始。高热通常持续两到七天并可高达41℃，可能伴随惊厥和其他并发症。没有针对登革热的特殊治疗。目前使用的用于登革热诊断的方法是基于通过ELISA对血清中的抗登革热IgM和IgG的血清学检测。这些血清学方法无法在疾病的早期阶段检出感染。因此需要快速、灵敏的方法用于在感染过程中的早期对登革热感染进行检测以进行更好的病人管理。

发明内容

因此，本公开涉及具有如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示的核苷酸序列的探针，可选地与可检测标签结合；具有如SEQ ID No.3或SEQ IDNo.4所示的核苷酸序列的引物；用于检测登革热感染的PCR反应混合物，所述混合物包含核酸扩增试剂、具有选自包含SEQ ID No.1和SEQ ID No.2的组中的核苷酸序列的探针或其探针的组合、以及具有如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的核苷酸序列的引物；检测和可选地量化登革热感染的方法，所述方法包括以下操作—（a）获得包含核酸扩增试剂、选自包含SEQ ID No.1和SEQ ID No.2的组中的探针、和具有如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的核苷酸序列的引物的PCR反应混合物，（b）将检测样品引入至PCR反应混合物用于进行PCR扩增以获得目标序列的拷贝，接着通过测量产生的荧光信号以检测登革热感染和（c）可选地，由所检测的信号构建标准曲线用于量化登革热感染；用于检测登革热感染的试剂盒，所述试剂盒包括具有选自包含SEQ ID No.1和SEQ ID No.2的组中的核苷酸序列的探针或其探针的组合，可选地在5'和3'端进行标记，具有如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的核苷酸序列的引物，和扩增试剂，可选地连同说明书；以及用于检测登革热感染的试剂盒的组装方法，所述方法包括将具有选自包含SEQ ID No.1和SEQ ID No.2的组中的核苷酸序列的探针或其探针的组合、具有如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的核苷酸序列的引物、和扩增试剂，可选地连同说明书进行组合的步骤。

附图说明

为了容易地理解本公开并获得实际效果，现在对示例性实施方式作出参考，如参考附图所进行的图解说明。附图连同下面的详细说明，被并入并构成说明书的一部分，并用于进一步图解说明实施方式和解释各种原理和优势，根据本公开，其中：

图1示出使用SEQ ID No.1通过即时PCR针对登革热血清型的扩增曲线。

图2示出使用SEQ ID No.2通过即时PCR针对登革热血清型的扩增曲线。

图3示出使用国家参考实验室引物和探针（National reference laboratory primers&probe）通过即时PCR针对登革热血清型的扩增曲线。

图4示出对数稀释曲线。

具体实施方式

本公开涉及具有如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示的核苷酸序列的探针，可选地与可检测标签结合。