[发明专利]纯化活性多肽或免疫偶联物的方法

权利要求书

1.一种纯化活性免疫偶联物的方法，其中所述免疫偶联物在一个或多个残基上被脱酰胺化，并且其中所述脱酰胺化作用导致了所述免疫偶联物效力的抑制，该方法包括：(a)将该免疫偶联物与一种阴离子交换AIEX色谱基质相接触；并且(b)用一种高盐缓冲液将该结合的免疫偶联物从该AIEX色谱基质洗脱，从而将该活性免疫偶联物与该脱酰胺化的变体分离。

2.一种用于从包含多肽以及该多肽的酸性变体的溶液产生经纯化的多肽的方法，其中该多肽的所述酸性变体导致了所述多肽效力的抑制，该方法包括：(a)将该多肽与一种阴离子交换（AIEX）色谱基质相接触，并且(b)用一种高盐缓冲液该所结合的多肽从该AIEX色谱基质洗脱，从而将所述多肽与该酸性变体分离并且产生一种经纯化的多肽。

3.一种用于从包含多肽以及该多肽的酸性变体的溶液中产生经纯化的多肽或免疫偶联物的方法，该方法包括：(a)在一种表达多肽或免疫偶联物的细菌细胞中产生该多肽或免疫偶联物；(b)将包含该多肽或免疫偶联物的包涵体从这些细菌细胞分离；(c)将从这些包涵体分离的多肽或免疫偶联物再折叠；(d)将包含该多肽或免疫偶联物的组合物与一种AIEX色谱基质相接触；并且(b)用一种高盐缓冲液将该结合的多肽或免疫偶联物从该AIEX色谱基质洗脱，从而将该多肽或免疫偶联物从该溶液纯化。

3.如权利要求2或3所述的方法，其中该酸性变体是一种脱酰胺化的变体。

4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中该AIEX基质包含季胺以及叔铵的离子交换基团。

5.如权利要求4所述的方法，其中该AIEX基质包含一种季氨（Q）基团。

6.如权利要求5所述的方法，其中该AIEX基质是Q琼脂糖凝胶。

7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中该多肽用一种线性或阶梯式的盐梯度洗脱。

8.如权利要求7所述的方法，其中该多肽用一种线性盐梯度洗脱。

9.如权利要求8所述的方法，其中该线性盐梯度是从约Tris/HCl、pH8.0中的150mM NaCl至约Tris/HCl、pH8.0中的300mM NaCl。

10.如权利要求9所述的方法，其中该线性盐梯度是从约Tris/HCl、pH8.0中的175mM NaCl至约Tris/HCl、pH8.0中的275mM NaCl。

11.如权利要求9所述的方法，其中该线性盐梯度是从约Tris/HCl、pH8.0中的192mM NaCl至约Tris/HCl、pH8.0中的245mM NaCl。

12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中该酸性或脱酰胺化变体的约75%至约99%被去除。

13.如权利要求12所述的方法，其中该酸性或脱酰胺化变体的约80%被去除。

14.如权利要求12所述的方法，其中该酸性或脱酰胺化变体的约85%被去除。

15.如权利要求12所述的方法，其中该酸性或脱酰胺化变体的约90%被去除。

16.如权利要求12所述的方法，其中该酸性或脱酰胺化变体的约95%被去除。

17.如权利要求12所述的方法，其中该酸性或脱酰胺化变体的约96%、97%、98%或99%被去除。

18.如权利要求1至17中任一项所述的方法，其中该多肽或免疫偶联物包括一种抗体或其抗原结合片段。

19.如权利要求18所述的方法，其中该抗体或抗原结合片段包括一个Fab、Fab'、F(ab')₂、Fd、单链Fv或scFv、双硫化物连接的Fv、V-NAR结构域、IgNar、内抗体、IgG△CH2、迷你抗体、F(ab′)₃、四体抗体、三体抗体、双体抗体、单一结构域抗体、DVD-Ig、Fcab、mAb²、a(scFv)₂、或scFv-Fc。

20.如权利要求18或19所述的方法，其中该抗体或抗原结合片段结合了一种细胞表面受体。

21.如权利要求20所述的方法，其中该细胞表面受体是CD22。