[发明专利]纯化活性多肽或免疫偶联物的方法

说明书

发明背景

发明领域

本发明提供了用于从包含一种多肽或免疫偶联物以及它的一种酸性变体的溶液中对该活性多肽或免疫偶联物进行纯化的方法，其中该酸性变体是所述多肽或免疫偶联物的一个脱酰胺化种类。本发明还提供了包含此类经纯化的多肽或免疫偶联物的配制品。

背景技术

大规模、经济的蛋白质纯化是生物制药行业的一个因素。治疗性蛋白质典型地是使用原核或真核细胞系产生的，这些细胞系经过工程化处理以表达来自一种重组质粒的感兴趣的蛋白质，该质粒包含编码该蛋白质的基因。将所希望的蛋白质从被送至细胞的组分和细胞副产物的混合物中以达到足以用作治疗剂（例如足以用作一种人类治疗物）的纯度进行分离由于多个原因对生物制品制造商提出了严峻的挑战。

基于蛋白质的药物产物的制造商必须遵守严格的监管标准，包括极为严格的纯度要求。为了确保安全性，监管机构（例如美国食品与药品监督管理局（FDA））要求基于蛋白质的药物产品基本上不含杂质，包括与产品相关的污染物（例如聚集体）、该重组蛋白的片段和变体以及与过程相关的污染物（例如宿主细胞蛋白、培养基组分、病毒、DNA以及外毒素）。尽管在生物制药行业可以获得并广泛使用不同的蛋白纯化方案，但他们典型地包括一个亲和纯化步骤，例如对于抗体而言进行蛋白A纯化，以便达到药学可接受的纯度。

形成一个可适用于某一特定生物分子或不同生物分子的纯化方案（该方案是成规模的、可控的、并且在策略上采用了特定树脂或树脂组合的用途）应当允许它在整个药物形成过程中的非常早期的阶段整合至产品形成过程中。设计一种纯化方案的方法能够将制造过程的昂贵费用变化最小化，否则这可能随后在药物发展中是必需的或在批准之后情况更坏。随着该过程成规模并且达到GMP生产条件，额外的固有复杂问题即产生，包括与树脂包装和缓冲液制备有关的复杂问题。制造过程及其能力可通过以下方式改进：简化纯化方案、取消过程步骤并且将产出和生产率最大化，同时维持正在纯化的分子的完整性和纯度。因此，令人希望的并且有利的是以一个简单并且有效的过程起始，该过程能产生一种具有高质量和高安全性的药物物质。

与药物产品的纯化相关的一个复杂问题是在整个纯化过程中维持效力。很多因素能造成效力的降低或抑制，包括在发展过程中药物产品的修饰。这种修饰能在该过程的各个阶段发生，例如当该蛋白质在细胞中表达时、或当已经从细胞中分离的蛋白质经受各种条件或缓冲液时。本发明提供了一种用于从包含多肽或偶联物的经修饰的变体的溶液纯化该活性多肽或免疫偶联物的方法，其中这种经修饰的变体的存在导致了最终药物产品效力的抑制。

发明概述

本发明提供了一种用于从包含多肽以及一种酸性变体（例如一种脱酰胺化的变体）的溶液中纯化感兴趣的多肽的方法。

具体而言，本发明提供了一种用于纯化活性免疫偶联物的方法，其中该免疫偶联物在一个或多个残基上脱酰胺化，并且其中这种脱酰胺化作用导致所述免疫偶联物效力的抑制，该方法包括：(a)将该免疫偶联物与一种阴离子交换AIEX色谱基质相接触；并且(b)用一种高盐缓冲液将该结合的免疫偶联物从该AIEX色谱基质洗脱，从而将该活性偶联物与该脱酰胺化的变体分离。

本发明还提供了一种用于从包含多肽以及该多肽的一种酸性变体的溶液中产生经纯化的多肽的方法，其中该多肽的酸性变体导致了该多肽效力的抑制，该方法包括：(a)将该多肽与一种阴离子交换（AIEX）色谱基质相接触，并且(b)用一种高盐缓冲液将该结合的多肽从该AIEX色谱基质洗脱，从而将所述多肽与该酸性变体分开并且产生一种经纯化的多肽。

本发明进一步提供了一种从含该肽以及该多肽的一种酸性变体的溶液中产生经纯化的多肽或免疫偶联物的方法，该方法包括：(a)在一种表达该多肽或免疫偶联物的细菌细胞中产生该多肽或免疫偶联物；(b)将包含多肽或免疫偶联物的包涵体从这些细菌细胞分离；(c)将从这些包涵体分离的多肽或免疫偶联物再折叠；(d)将包含该多肽或免疫偶联物的组合物与一种AIEX色谱基质相接触；并且(b)用一种高盐缓冲液将该结合的多肽或免疫偶联物从该AIEX色谱基质洗脱，从而将该多肽或免疫偶联物从该溶液中纯化。

在某些实施方案中，该酸性变体是一种脱酰胺化的变体。在其他实施方案中，在纯化过程中该酸性或脱酰胺化变体的约75%至约99%之间被去除，尤其是约75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%。

本发明的AIEX基质包含季胺或叔胺的离子交换基团，一个季氨（Q）基团，在某些实施方案中，该AIEX基质是Q琼脂糖凝胶。