[发明专利]表达具有人λ可变区和小鼠恒定区的轻链的小鼠

说明书

领域

包含与小鼠或人轻链恒定区(λ或kappa(κ))有效连接的小鼠或人λ可变(Vλ)轻链序列的遗传修饰的小鼠。表达包含含有来源于人λ可变(hVλ)基因区段的可变结构域、人λJ(hJλ)基因区段和小鼠轻链恒定(C_L)结构域的免疫球蛋白轻链的表位结合蛋白的遗传修饰的小鼠。遗传修饰的小鼠，其在内源小鼠轻链基因座上包含未重排的免疫球蛋白lambda(λ)轻链可变核酸序列。能够重排并且从内源轻链基因座表达嵌合人λ/小鼠C_L轻链的小鼠，所述内源轻链基因座包括，利用一个或多个hVλ基因区段以及一个或多个hJλ基因区段对所有内源小鼠轻链可变区基因区段的替换。包含hVλ结构域和小鼠C_L结构域的体细胞突变的抗体。

背景

表达为完全人或者部分人及部分小鼠的抗体的小鼠在本领域是已知的。例如，已报导了，从包含人轻链和重链免疫球蛋白可变区基因的转基因表达完全人抗体的转基因小鼠。包括利用人HCVR和LCVR基因区段对内源小鼠重链可变区(HCVR)基因区段和κ轻链可变区(LCVR)基因区段的替换并且产生具有嵌合人/小鼠κ链的嵌合抗体的遗传修饰的小鼠也是已知的。

抗体轻链由两个分离的基因座:kappa(κ)和lambda(λ)之一编码。小鼠抗体轻链主要为κ型。人中的κ对λ轻链使用的比率为约60:40，然而在小鼠中，该比率为约95:5。小鼠中κ轻链的偏爱性使用据报导在能够表达完全或部分人抗体的遗传修饰的小鼠中被保留。因此，表达完全或部分人抗体的小鼠显示在λ可变使用上受到限制。

本领域需要产生用于制备表位结合蛋白的λ可变区(无论是小鼠的还是人的)。本领域需要表达完全或部分人抗体的小鼠，其中所述小鼠显示增加的λ可变(Vλ)使用。

本领域需要表达完全或部分人抗体的小鼠，其中所述小鼠显示增加的λ可变(Vλ)使用。

概述

提供了遗传修饰的小鼠、胚胎、细胞、组织以及用于修饰小鼠的核酸构建体，和用于产生和使用它们的方法及组合物。提供了在kappa(κ)轻链的背景下产生lambda(λ)可变区(人或非人)的小鼠和细胞。还提供了在κ或λ轻链的背景下，例如从内源小鼠轻链基因座，产生人λ可变区的小鼠和细胞。还提供了，用于产生包含λ可变区的抗体的方法。还提供了，用于选择与关联(cognate)λ可变区一起表达的重链的方法。

提供了包括体细胞突变的可变区的嵌合和人抗原结合蛋白(例如，抗体)以及编码其的核酸，包括具有包含融合至小鼠轻链恒定结构域的、来源于人Vλ和人Jλ基因区段的可变结构域的轻链的抗体。

在一个方面，提供了在包含小鼠恒定区的轻链上表达人λ可变区序列的小鼠。在一个方面，提供了在包含κ恒定区的轻链上表达人λ可变区序列的小鼠。在一个方面，提供了从内源小鼠轻链基因座表达包含人λ可变区序列的轻链的小鼠。在一个方面，提供了包含重排的轻链基因的小鼠，所述轻链基因包含连接至小鼠恒定区序列的人λ可变序列;在一个实施方案中，小鼠恒定区序列为λ恒定序列;在一个实施方案中，小鼠恒定区序列为κ恒定序列。

在一个方面，提供了遗传修饰的小鼠，其中所述小鼠包含未重排的人λ轻链可变基因区段(hVλ)和人λ连接基因区段(hJλ)。在一个实施方案中，未重排的hVλ和hJλ在小鼠轻链基因座上。在一个实施方案中，未重排的hVλ和未重排的hJλ在转基因上并且有效地连接至人或小鼠恒定区序列。在一个实施方案中，未重排的hVλ和未重排的hJλ在附加体(episome)上。在一个实施方案中，小鼠能够产生免疫球蛋白，所述免疫球蛋白包含从未重排的hVλ序列和hJλ序列以及小鼠轻链恒定区(C_L)核酸序列衍生的轻链。还提供了用于产生和使用遗传修饰的小鼠的方法和组合物。提供了抗体，所述抗体包含(a)融合至小鼠重链恒定区的人重链可变结构域(hV_H)，和(b)融合至小鼠C_L结构域的人Vλ;包括其中，例如在本发明的小鼠的抗体或免疫细胞的选择过程中，对一个或多个可变结构域进行体细胞突变。在一个实施方案中，未重排的hVλ和未重排的hJλ与人或小鼠κ恒定区(Cκ)有效地连接。在一个实施方案中，未重排的hVλ和未重排的hJλ与人或小鼠λ恒定区(Cλ)有效地连接。

在一个方面，提供了在其种系中在内源小鼠轻链基因座上包含人λ轻链可变区序列的小鼠，其中人λ可变区序列在包含小鼠免疫球蛋白恒定区基因序列的轻链中表达。