[发明专利]长效药物制剂

说明书

发明领域

本发明涉及长效治疗制剂及其使用方法，所述制剂包含含有载体的经遗传修饰的微器官，所述载体包含与一个或多个调节序列可操作地连接的编码治疗性多肽如红细胞生成素的核酸序列。

发明背景

治疗剂可以口服、经皮、通过吸入、通过注射或通过缓释贮库(depot with slow release)递送。然而，递送方法受限于药剂在受体中经历的过程、频繁施用的需要和对可用分子大小的限制。对于一些方法，治疗剂的量在施用间变化。

涉及将期望的核酸序列/片段亚克隆到载体中(所述载体随后用于修饰特定宿主细胞，所述宿主细胞应产生所需的蛋白质以用于进一步纯化步骤)的蛋白质生成技术在表达的蛋白质的量、蛋白质分泌、翻译后修饰(例如糖基化和蛋白质的精确折叠)等方面受到限制。而且，即使能够获得高水平的蛋白质生成，之后也必须产生大量的重组蛋白并纯化至不含污染物。纯化路线的开发是非常漫长的过程。而且一旦获得纯化的重组蛋白，就必须进行进一步配制以使其稳定和可接受地引入动物或人类中。此外，即使经配制，纯化的重组蛋白仍然由于保持和储存限制而具有有限的贮存期限；因此经常需要反复纯化和配制更多的蛋白质。开发适当制剂的过程也是耗时、困难和昂贵的。

因此，广泛认识到需要长效的基于蛋白质的治疗分子，其具有必需的翻译后修饰以保留它们的生物活性，其可被廉价且快速地制备，而不需要通常与获得高水平重组蛋白相关的繁琐且昂贵的方法。

一些研究者已试图通过基因治疗获得重组基因产物的体内表达。通常将病毒载体用于体内转导细胞以表达重组基因产物。这些基于病毒的载体具有有益的特性，例如感染靶组织的天然能力。然而，基于逆转录病毒的载体需要在靶组织的基因组内整合以允许重组产物表达(具有激活固有癌基因的潜能)并且只能用于转导活跃分裂的组织。病毒载体通常也不能经受长期转基因表达，这可能至少部分是由于它们因再次宿主免疫响应而被消除。

因此，本领域仍然需要具有持续几周或更长时间的持续高表达水平的重组基因产物制剂和使用这些制剂来治疗疾病的方法。

发明概述

在一个实施方案中，本发明提供包含经遗传修饰的微器官的长效治疗制剂，所述微器官包含含有与一个或多个调节序列可操作地连接的核酸序列的载体，其中所述核酸序列编码治疗性多肽，由此所述制剂的施用使血液血红蛋白(Hb)水平比基础水平提高，且所述提高保持至少一个月。在一个实施方案中，所述载体是辅助病毒依赖型腺病毒载体。在一个实施方案中，所述治疗性多肽是红细胞生成素。

在另一个实施方案中，本发明提供在持续的时间内向有需要的对象提供治疗性多肽的方法，所述方法包括：提供一个或多个经遗传修饰的微器官，所述微器官包含含有与一个或多个调节序列可操作地连接的核酸序列的载体；并将所述经遗传修饰的微器官植入所述对象中，其中所述核酸序列编码治疗性多肽，由此所述制剂使Hb水平比基础水平提高，并将所述提高保持至少一个月。在另一个实施方案中，所述提高保持超过一个月。在一个实施方案中，所述载体是辅助病毒依赖型腺病毒载体。在一个实施方案中，所述治疗性多肽是红细胞生成素。在另一个实施方案中，有需要的对象患有贫血。在另一个实施方案中，有需要的对象患有感染。在另一个实施方案中，有需要的对象患有癌症。

在一个实施方案中，本发明提供18-150UI红细胞生成素/千克所述对象体重/天的有效剂量。

在一个实施方案中，本发明提供用于在Hb水平提高的时间的至少90%中将提高的Hb水平保持在10-12g/dl Hb范围内的方法。

附图简述

图1显示由本发明的制剂体外产生的重组优化的人干扰素α(IFNα)的水平。

图2显示由本发明的制剂体外产生的重组人红细胞生成素(hEPO)的水平。HD-Ad-CAG-wt-hEPO GMMO滴定法(A)。以HD-Ad-CAG-wt-hEPO病毒：1:25；1:100和1:1000稀释度的渐增稀释度转导微器官。将Ad5/CMV/wt-hEPO稀释成1:10和1:50的工作浓度。由两种不同皮肤H-1和H-2产生的GMMO之间的比较(B)。以HD-Ad-CAG-wt-hEPO1:25转导微器官。条形指示通过ELISA测量的在每3-4天收集和替换的培养基中的hEPO浓度。

图3显示得自包含表达EPO的无肠腺病毒的优化制剂和包含表达EPO的腺病毒-5的微器官的峰值体外红细胞生成素(EPO)表达水平的百分数。用HD-Ad-CAG-hEPO以1:25或用Ad5/CMV/hEPO以1:10转导微器官。