[发明专利]长效人生长激素缀合物的液体制剂

说明书

技术领域

本发明涉及不含白蛋白的长效人生长激素缀合物的液体制剂，其在长期贮存时可确保所述长效人生长激素缀合物的稳定性，其中所述长效人生长激素缀合物包含与免疫球蛋白Fc区相连接的人生长激素，并且与天然形式相比具有延长的体内稳定性。

背景技术

人生长激素(下文中称为“hGH”)是由垂体前叶腺(anterior pituitarygland)分泌的无糖基化的(aglycosylated)肽激素，并且与在多种组织的细胞表面上的特异性受体相互作用，从而刺激分泌其他生长因子，以负责增加身体多个部分的尺寸。自从发现来自人垂体腺的生长激素是垂体性侏儒症(pituitary dwarfism)的有效治疗剂以来，对hGH的需求出现了爆发性地增长。然而，可从人垂体腺提取的hGH的供应十分有限。另外，在接受尸体来源之hGH的儿童中发生了退行性神经病(degenerative neurological disorder)克-雅病(Creutzfeldt-Jacob disease)之后，美国FDA已经禁止使用从尸体垂体腺提取的hGH，这是基于假设引起疾病的传染性朊病毒(prion)随尸体来源的hGH而传播(Roger，L.，Science234：22，1986)。目前，使用基因重组技术通过E.coli生产的生物合成的人生长激素已经被FDA批准市售。

多肽(例如hGH)由于其低稳定性而易于退变(degenerate)，并且容易被血清蛋白酶降解并且被肾或肝移除。因此，包含多肽作为药物活性成分的药物必须频繁地向患者施用以维持其血清水平和效价。然而，通过频繁施用(在大多数情况下是以注射的形式)蛋白质药物来维持活性多肽的高血清水平对患者来说是痛苦的。

为了解决这些问题，已尝试通过提高蛋白质药物的血清稳定性并且长期维持蛋白质药物的高血清水平来使药效最大化。因此，需要在患者中具有提高的稳定性以及维持在足够高水平的活性(而不引起免疫应答)的蛋白质药物的制剂。

为了稳定蛋白质并防止与蛋白酶相接触和肾损失，常规地将高度可溶性聚合物(例如聚乙二醇(PEG))化学添加至蛋白质药物的表面。非特异性缀合至目标蛋白质的某些或多个位置后，PEG可提高目标蛋白质的溶解度，使蛋白质稳定并防止其降解，而不会引起显著的副作用(Sada等，J.Fermentation Bioengineering，1991，71：137-139)。PEG缀合可有助于蛋白质的稳定，但是会显著地降低其活性。较高分子量的PEG具有降低的与蛋白质的反应性，因此降低产量。

用于提高生理活性蛋白质的体内稳定性的一种替代性策略是通过使用基因重组将目标蛋白质与具有高血清稳定性的蛋白质相融合，这是将编码蛋白质的各基因彼此相连接并且培养用融合基因转化之动物细胞的方法。例如，已经报道了融合蛋白质，其中已知提高蛋白质稳定性的白蛋白或其片段通过基因重组与目标蛋白质相融合(国际专利公开No.WO93/15199和No.WO93/15200，欧洲专利公开No.EP413,622)。

美国专利No.5,045,312公开了使用交联剂与牛血清白蛋白或鼠免疫球蛋白缀合的hGH具有与未修饰的生长激素相比增强的活性。在该专利中提及的唯一交联剂是低分子量化合物(例如，碳二亚胺或戊二醛)。然而，这样的低分子量交联剂由于其非特异性连接而不会确保均一的组成并且可能具有体内毒性。另外，该专利仅揭示了通过化学偶联提高生长激素的活性，但是没有显示出化学偶联对于针对其他多肽药物之活性的作用，并且没有理解与蛋白质之稳定性(例如，持久性和血清半衰期的提高)的相关性。

最近，引入了生理活性多肽与免疫球蛋白Fc区和非肽聚合物之间形成的缀合物作为长效制剂，其使得蛋白质药物具有最小限度降低的活性和提高的稳定性这二者，如韩国专利No.10-0567902(Physiologically Active Polypeptide Conjugate Having Improved In Vivo Durability)和韩国专利No.10-0725315(Protein Complex Using An Immunoglobulin FragmentAnd Method For The Preparation Thereof)中所述。