[发明专利]使用嵌合性嗅觉受体产生cAMP的方法

说明书

技术领域

本发明涉及使用嵌合性嗅觉受体产生cAMP的方法。

背景技术

嗅觉受体是三聚体G蛋白偶联受体（GPCR），更具体地说是三聚体G蛋白偶联七跨膜型受体的1种。

图1表示将气味分子对细胞膜的刺激转换成电信号的机制。

嗅觉受体是在细胞膜上表达的膜蛋白。该细胞膜主要由脂质双层膜构成。脂质双层膜具有各层由高密度排列的磷脂分子构成的双层结构。该脂质双层膜示意性地示于图1的中央。图1中，脂质双层膜的上侧为细胞外侧，而脂质双层膜的下侧为细胞内侧。在该嗅觉受体的附近配置有三聚体G蛋白。

该三聚体G蛋白是由α亚基（Gαolf）、β亚基（Gβ）及γ亚基（Gγ）所构成的异三聚体。细胞含有腺苷酸环化酶。图1中，腺苷酸环化酶用符号“AC”表述。腺苷酸环化酶准确地说是跨膜型蛋白质。蛋白质RTP1S（序列号42）具有辅助嗅觉受体在细胞膜上表达的功能。另外，该蛋白质RTP1S与上述机制并不直接有关系。

接着说明上述机制。气味分子结合在该嗅觉受体上。该结合将三聚体G蛋白分离为α亚基（Gαolf）和βγ复合体。该βγ复合体由亚基Gβ及Gγ构成。分离出的Gαolf将腺苷酸环化酶（AC）活化。活化后的腺苷酸环化酶（AC）将三磷酸腺苷（ATP）转换成环状腺苷一磷酸（cAMP）。

环状腺苷一磷酸（cAMP）将离子通道（具体地说，例如环核苷酸门控型离子通道（CNG））活化。该活化引起离子由细胞内被输送至细胞外、或者由细胞外被输送至细胞内。该离子的输送程度可以以电信号的形式被测定。

当然，环状腺苷一磷酸（cAMP）的产生量越多，则可获得越多的电信号。该更多的电信号使测定的精度提高。

另外，已知对β1肾上腺素能受体的刺激会使细胞内的cAMP的产生量增加。可以预见组装了β1肾上腺素能受体的一部分的多个嗅觉受体会使cAMP增加、由此使测定精度提高。这种嗅觉受体、即组装了其他受体（这种情况下为β1肾上腺素能受体）的一部分的嗅觉受体被称作“嵌合性嗅觉受体”。

（现有技术文献的公开内容）

非专利文献1公开了肾上腺素能受体的细胞内结构域IC3及IC4是对于与三聚体G蛋白的相互作用重要的区域。

非专利文献2公开了通过对IC3结构域导入点突变、对IC4结构域导入点突变、IC4结构域的缺损、或者用视紫红质（Rhodopsin）的IC4结构域将IC4结构域置换，cAMP的产生量会急剧降低。

非专利文献3公开了在Rho-mOREG的N末端附加有Flag标签的Flag-Rho mOREG比Rho-mOREG更为迅速地向细胞膜表面移动，由此提高了嗅觉受体的应答。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：Noel M.Delos Santos,Lidia A.Gαrdner,Stephen W.White,Suleiman W.Bahouth（2006）J.Biol.Chem.,281,12896-12907

非专利文献2：Kato A.,Katada S.,Touhara K.（2008）J.Neurochem.,107,1261-1270

非专利文献3：Katada S.,Tanaka M.,Touhara K.（2004）J.Neurochem.,90,1453-1463

发明内容

发明要解决的技术问题

但是，本发明人等发现了，与上述期待不同，绝大多数的嵌合性嗅觉受体会导致cAMP的产生量减少。

本发明的目的在于提供使cAMP的产生量增加的嵌合性嗅觉受体。

用于解决技术问题的手段

以下的方法A1～C6、嵌合性嗅觉受体D1～D4、脂质双层膜E1～E5或者反应体系F1～F5解决上述技术问题：

A1.一种使用嵌合性嗅觉受体产生cAMP的方法，其具备以下的工序：

准备具备第1层、脂质双层膜及第2层的反应体系的工序（a），

这里，所述脂质双层膜被所述第1层及所述第2层夹持，

所述脂质双层膜具备所述嵌合性嗅觉受体及腺苷酸环化酶，

所述嵌合性嗅觉受体贯穿所述脂质双层膜，

所述腺苷酸环化酶贯穿所述脂质双层膜，

所述第2层含有ATP及G蛋白、

所述G蛋白配置在所述嵌合性嗅觉受体的一端附近，