[发明专利]自激淋巴球培养用培养基合成物及利用此的自激淋巴球培养方法

权利要求书

1.一种自激淋巴球培养用培养基合成物，由细胞培养用培养基及向细胞培养用培养基添加的添加剂构成，用于大量培养自激淋巴球，其特征在于：

所述添加剂包括白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素12（IL-12）及白细胞介素18（IL-18）外还添加CD3及CD16抗体。

2.根据权利要求1所述的自激淋巴球培养用培养基合成物，其特征在于：

所述细胞培养用培养基含有800～1200IU（国际单位）/ml的IL-2。

3.根据权利要求1所述的自激淋巴球培养用培养基合成物，其特征在于：

所述添加到细胞培养用培养基的添加剂，以所述细胞培养用培养基39ml为准，由17×10⁶～19×10⁶IU/ml的IL-23～10ul、由90～110ug/ml的IL-123～10ul、90～110ug/ml的IL-1810～30ul、0.9～1.1mg/ml的抗CD3抗体2～40ul及0.9～1.1mg/ml的抗CD16抗体2～40ul构成。

4.根据权利要求3所述的自激淋巴球培养用培养基合成物，其特征在于：

所述添加剂以所述细胞培养用培养基39ml为准，还包括190～210mM的左旋谷酰胺（L-glutamine）350～430ul及2～5ml自体血浆（plasma）。

5.根据权利要求1所述的自激淋巴球培养用培养基合成物，其特征在于：

所述添加到细胞培养用培养基的添加剂以所述细胞培养用培养基67ml为准，由

17×10⁶～19×10⁶IU/ml的IL-23.5～7.8ul、由90～110ug/ml的IL-122～10ul、90～110ug/ml的IL-1820～50ul、0.9～1.1mg/ml的抗CD16抗体4～80ul构成。

6.根据权利要求5所述的自激淋巴球培养用培养基合成物，其特征在于：

所述添加剂以细胞培养用培养基67ml为准，还包括190～210mM的左旋谷酰胺（L-glutamine）650～740ul及2～5ml自体血浆（plasma）。

7.一种自激淋巴球培养方法，其特征在于：包括

从人类末梢血萃取淋巴球的阶段；

在添加有白细胞介素2（IL-2）、左旋谷酰胺（L-glutamine）、自体血浆（plasma）的培养液中，在存在白细胞介素12（IL-12）、白细胞介素18（IL-18）、抗CD3及抗CD16抗体的条件下，培养所述萃取的淋巴球的第1培养阶段；

把第1培养阶段中培养结束的培养混合液，混合到添加有IL-2、左旋谷酰胺及自体血浆的培养液中，在存在IL-12、抗CD16抗体、IL-18的条件下，进行培养的第2培养阶段。

8.根据权利要求7所述的自激淋巴球培养方法，其特征在于：

所述第1培养阶段中，把所述萃取的淋巴球首先以添加有IL-2、左旋谷酰胺、自体血浆的培养液，在固化有抗CD3抗体的第1培养容器内进行培养后，再把所述第1培养容器内的培养混合液移到第2培养容器，添加IL-12及抗CD16抗体、再次进行培养后，向所述第2培养容器内添加IL-18、再一次进行培养。

9.根据权利要求7所述的自激淋巴球培养方法，其特征在于：

所述第1培养阶段中，把所述萃取的淋巴球首先以装放有IL-2、左旋谷酰胺及自体血浆，固化有抗CD3抗体的第1培养容器，培养30分钟至2小时后，把所述第1培养容器内的培养混合液移到第2培养容器中，添加IL-12及抗CD16抗体，培养1小时至3小时后，再向所述第2培养容器添加IL-18，培养48小时至72小时后，向所述第2培养容器内一边添加含IL-2、左旋谷酰胺及自体血浆的培养液，一边培养12小时至18小时后，把所述第2容器内的培养混合液移到第3培养容器，添加添加IL-2、左旋谷酰胺、自体血浆，培养2天至3天。

10.根据权利要求7所述的自激淋巴球培养方法，其特征在于：

所述第2培养阶段中，把第1培养阶段培养出的培养混合液，首先以添加有IL-2、左旋谷酰胺及自体血浆的培养液，添加IL-12及抗CD16抗体，进行培养后，向所述培养的培养混合液中添加IL-18，再次进行培养。