[发明专利]包含小热激蛋白的微粒

说明书

发明领域

本发明属于医药领域。具体而言，其属于用于治疗炎性疾病的药物领域。

发明背景

小热激蛋白家族以一个共同特点为特征，即存在含90-100个残基的高保守的所谓α晶体蛋白结构域。脊椎动物眼晶状体蛋白–αA-和αB-晶体蛋白以及包括HSPB1、HSPB2、HSPB3、HSPB6、HSPB7、HSPB8、HSPB9和HSPB10在内的15-30-kDa热激蛋白普遍存在的群均属于该小热激蛋白组。眼晶状体α晶体蛋白的2个亚基是αA-晶体蛋白(CRYAA)和αB-晶体蛋白(CRYAB)。虽然CRYAA优选在眼晶状体中表达，CRYAB在许多组织和器官中广泛表达。认为小热激蛋白的主要作用是抵消胁迫条件对细胞完整性的去稳定化影响。有证据显示其参与变性疾病等。

α晶体蛋白被描述为许多疾病和病症中的潜在药物。WO2008073466中，描述了抑制患者炎性疾病的方法，所述方法包含给予患者治疗有效剂量的游离可溶CRYAB蛋白，其中组织内受自身免疫病影响的免疫细胞在该试剂存在下减少活化。WO9533997中，描述了游离可溶CRYAB蛋白在多发性硬化中的医学应用。

α晶体蛋白家族的蛋白的缺点是这些作为游离可溶蛋白的产品不如预期有效，特别是给予人时。本发明的目标是解决此问题。

发明内容

本发明基于以下发现：小热激蛋白以生物可降解微粒形式给予时相较以其游离可溶形式给予时，能有效得多地激活巨噬细胞。因此，此发明方面的小热激蛋白不作为游离可溶蛋白给予。

因此，本发明提供一种生物可降解微粒，所述生物可降解微粒的直径为0.2-3.5微米，且含药学有效量的诱导巨噬细胞中IL-10产生的至少一种小热激蛋白，所述小热激蛋白包含与SEQ ID NO:1和12-26所列任何序列具有至少50%相同性的氨基酸序列或其组合。与SEQ ID NO:1和12-26所列任何序列有至少50%的氨基酸序列相同性表明所述小热激蛋白包含α晶体蛋白结构域。这种α晶体蛋白结构域是确定其是否激活巨噬细胞的蛋白活性区，巨噬细胞活化通过诱导该巨噬细胞中IL-10产生而趋于明显。α晶体蛋白结构域可与SEQ ID NO:1和12-26具有至少50%，优选至少55%，更优选至少60%、70%、80%、90%或95%的氨基酸序列相同性。所述小热激蛋白优选是具有选自SEQ ID NO:2-11的氨基酸序列的蛋白质。所述小热激蛋白更优选是具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的蛋白质。

在优选实施方式中，所述生物可降解微粒是生物可相容的。在其它优选实施方式中，所述微粒包含己内酯、聚乳酸(PLA)、乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)或乳酸-羟甲基乙醇酸共聚物(PLHMGA)。所述生物可降解微粒优选具有0.2-5μm的平均直径，更优选0.2-3.5μm。

本发明还提供根据本发明用于对象医学治疗的生物可降解微粒。所述对象优选是人对象。所述医学治疗优选针对炎性疾病。所述炎性疾病优选是皮肤、粘膜、肺、神经系统、血管系统、胰腺或关节的急性或慢性炎症性病症，优选皮炎、牛皮癣、湿疹、克罗恩病、溃疡性结肠炎、牙周炎、扁平苔癣、硬化性苔癣、慢性阻塞性肺疾病、气肿、阿尔茨海默病、帕金森病、痴呆、视神经炎、脑炎、炎性周围神经病、动脉粥样硬化、血管炎、风湿性关节炎或糖尿病。

本发明还提供含治疗有效剂量的本发明所述生物可降解微粒的药物组合物。优选地，药物组合物中存在的至少百分之50、60、70、80或90的微粒是本发明的所述生物可降解微粒。

本发明还提供产生本发明所述生物可降解微粒的方法，所述方法包括以下步骤：混合含CRYAB的水溶液与溶于挥发性有机溶剂(优选二氯甲烷(DCM))的己内酯、PLA、PLGA或PLHMGA溶液，以提供水/挥发性有机溶剂二相系统；乳化所述水/挥发性有机溶剂二相系统以提供油包水乳液；向含聚乙烯醇的水溶液中加入所述油包水乳液，并乳化所得混合物以提供水包油包水乳液；使所述挥发性有机溶剂从所述水包油包水乳液中蒸发，并在所述蒸发过程中形成生物可降解微粒。

本发明还提供治疗患有炎性疾病的对象的方法，包含给予所述对象治疗有效量的本发明的生物可降解微粒或本发明的药物组合物。

附图简要说明

图1显示基于乳酸和乙醇酸合成具有羟基侧基的亲水性聚酯。

图1的反应流程显示亲水性聚酯合成中的关键步骤，所述亲水性聚酯能用于产生比传统聚(乳酸-共-乙醇酸)聚合物更亲水的微球。这种微球的制备由Ghassemi等更详细描述[J.Control.Release138:57-63(2009)]。BMMG单体中R=CH₃。