[发明专利]用于检测和/或定量人类DNA的方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学、诊断学领域，更具体来说属于分析和法医学领域。本发明还属于核酸扩增和定量领域，更具体来说属于DNA定量领域。

背景技术

在所有DNA分型方法中，以及各种其他科学领域的DNA检测中，测定从法医样品以及其他样品回收的DNA的量是一个关键步骤。例如对于多重DNA分型试剂盒来说，为了产生最优结果，通常需要输入的DNA在0.5至2ng的狭窄范围内。因此，为了确保阳性结果是阳性结果和/或阴性结果是由不存在DNA造成的阴性结果，DNA的定量是绝对重要的。此外，法医DNA测试实验室的质量标准要求人类特异性的DNA定量。这是由于分离技术可能将人类DNA与细菌和其他外源DNA一起回收而造成的。已经开发了允许对人类特异性DNA进行定量的许多方法步骤，包括初始印迹（start-blot）技术、基于液体的杂交测定法和实时PCR（聚合酶链反应）。目前，由于实时PCR的动态范围宽并且易于自动化，实时PCR是主导技术。

现代的STR试剂盒已变得灵敏得多，并且即使使用少量DNA也能获得良好结果。因此，对于允许精确和准确定量甚至低浓度样品中的人类DNA的方法、试剂盒和核酸区域存在着需求。已经有某些定量和检测试剂盒可用，然而它们具有严重的缺点。一种这样的试剂盒是Quantifiler Human试剂盒（Applied Biosystems），另一种试剂盒是Quantifiler Duo试剂盒（Applied Biosystems），另一种试剂盒是Plexor HY实时PCR定量试剂盒（Promega）。Quantifiler Duo试剂盒和Plexor HY试剂盒两者都靶向基因组上的常染色体和性染色体（Y染色体）靶标。

所述试剂盒的缺点：根据LaSalle等，（Forensic Science International:Genetics，“通过实时聚合酶链反应进行DNA定量的单拷贝和多拷贝方法的分析”（Analysis of Single and Multi-copy Methods for DNA Quantification by Real-Time Polymerase Chain Reaction）），与Plexor HY相比，Quantifiler试剂盒在定量中更准确，但是具有较低的动态范围。Plexor HY由于扩增多拷贝靶标而提供较高的动态范围，但是准确性较低。这种较低的准确性可以归因于多拷贝靶标。如果由于例如靶标拷贝数的不稳定性，扩增少于基因组上全套20个拷贝，那么常染色体与性染色体（Y）靶标之间的扩增比率可能发生变化。Plexor HY试剂盒的动态范围略好于其他试剂盒（LaSalle等，Forensic Science International:Genetics，“通过实时聚合酶链反应进行DNA定量的单拷贝和多拷贝方法的分析”（Analysis of Single and Multi-copy Methods for DNA Quantification by Real-Time Polymerase Chain Reaction））。在统计学比较中，LaSalle等证实了这两种试剂盒之间的显著差异。

法医学中的另一个重要参数是必须进行分析的DNA的降解等级。由于Quantifiler Human和PlexoHY试剂盒的扩增子的大小从62至133个碱基对（bp）不等，因此当将试剂盒应用于降解的DNA时，预期可能存在显著差异。

发明概述

本发明解决了上面指出的问题，并提供了如下所概述的以下解决方案。

一方面，本发明涉及用于定量和/或检测样品中基因组的一个或多个核酸的方法，其中

a.对所述核酸进行扩增，并且被扩增的基因座是基因组中的多拷贝基因座，

b.所述多拷贝基因座在至少两个不同的染色体上具有拷贝，

c.并且对扩增产物进行检测和/或定量。