[发明专利]用于在相同反应容器内的细胞裂解和PCR的方法

权利要求书

1.用于扩增靶核酸的方法，其包括步骤

a）将包含一个或多个活细胞的具有第一体积的液体样品转移到容器内，

b）向所述容器中加入具有第二体积的PCR反应缓冲液，其中所述第二体积是所述第一体积至少2x大，

c）将所述容器在至少90℃温育至少30秒，

d）通过用热稳定的DNA聚合酶的聚合酶链反应扩增所述靶，而不执行中间纯化步骤，

其特征在于步骤a）至d）在同一容器内执行。

2.根据权利要求1的方法，其特征在于所述容器是微量滴定板的孔。

3.根据权利要求2的方法，其特征在于所述微量滴定板的所述容器包含PCR扩增引物的干燥组合物，所述组合物任选包含或者至少一种标记的杂交探针或双链DNA结合荧光化合物。

4.根据权利要求3的方法，其特征在于所述干燥的组合物另外包含热稳定的DNA聚合酶和dNTPs。

5.根据权利要求1的方法，其特征在于所述容器是毛细管或反应管的条的管。

6.根据权利要求1-5的方法，其特征在于在步骤a）之前包含至少一个或多个活细胞的所述液体样品已通过细胞分选方法获得。

7.根据权利要求1-6的方法，其中步骤a）的所述活细胞的数目与在其中执行步骤d）的聚合酶链反应的液体体积相比较的比值不超过2细胞/μl。

8.根据权利要求7的方法，其中所述比值是至少1细胞/25μl。

9.根据权利要求1-8的方法，其中所述靶DNA是单拷贝DNA。

10.一种试剂盒，其包含

- 设计为适合热循环仪仪器的多个反应容器，

- 包含能够执行PCR的热稳定的DNA聚合酶和dNTPs的PCR反应缓冲液。

11.根据权利要求10的试剂盒，其中所述反应容器包含至少一对PCR扩增引物和任选的或者至少一种标记的杂交探针或双链DNA结合荧光化合物的干燥组合物。

12.根据权利要求10-11的试剂盒，其中所述多个反应容器以微量滴定板或反应容器的线性条的形式彼此物理连接。

13.根据权利要求10-12的试剂盒，其中所述热稳定的聚合酶通过在90℃温育至少1分钟进行热活化。