[发明专利]抗人肿瘤坏死因子1型受体抗体

说明书

技术领域

本发明涉及一种IgG1类型的抗人肿瘤坏死因子1型受体（anti-huTNFR1）的抗体和用作肿瘤坏死因子（TNF）拮抗剂的药物制剂。

背景技术

肿瘤坏死因子（TNF）是一多效性细胞因子和炎症中枢介质。TNF水平升高与各种炎症疾病有关，包括类风湿性关节炎、牛皮癣和克罗恩氏病。几种TNF中和试剂已被核准用于治疗这些疾病，包括可溶的TNF受体（依那西普）以及抗TNF抗体（英夫利昔单抗、阿达木单抗、赛妥珠单抗和戈利木单抗），而更多试剂正在被研发。超过1百万的患者在用TNF拮抗剂进行治疗，疗效都有据可查。但是，全球TNF抑制剂在相当长时间内增加了结核病的复发、严重感染以及甚至恶性肿瘤的风险。因此，所有被批准的抗TNF药的医药信息都包括大量的警告和注意事项。

两种TNF受体（CD120a、TNFR1和CD120b、TNFR2）通过结合TNF来调节信号转导（Locksley等人，Cell的2001年2月23日第104（4）卷第487-501页）（Locksley et al.Cell.2001Feb23;104(4):487-501）。促发炎反应主要通过广泛表达的TNFR1来调节。TNFR1通过膜结合形式的TNF（mTNF）和可溶的TNF（sTNF）激活，sTNF通过mTNF的溶蛋白性裂解产生。相反，通过例如免疫细胞、内皮细胞和神经细胞以更为受限的方式表达的TNFR2只能通过mTNF激活。TNFR2的激活主要诱导产生抗凋亡信号，并能导致细胞体外增殖。此外，TNFR2似乎也在组织恒定和再生方面发挥作用。

TNFR1信号的选择性抑制作为整体的TNF中和的替代，受到越来越多的关注，TNF整体中和对两种TNF受体均有影响。最近，据报道，一TNF突变蛋白（R1抗TNF）可选择性地中和TNFR1的活性（Shibata等人，Cytokine的2008年11月第44（2）卷第229-233页。电子出版：2008年9月23日）（Shibata et al.Cytokine.2008Nov;44(2):229-33.Epub2008Sep23）。作为未修饰或作为聚乙二醇修饰蛋白（PEG-R1抗TNF）来执行功能的这类TNF突变蛋白在小鼠急性肝炎模型和小鼠胶原性关节炎模型中显示出疗效。选择性抑制TNFR1的有益效果从显性负性型TNF突变蛋白（XPro1595）得到进一步支持，该蛋白能够和sTNF形成无活性复合物，从而在通过TNFR1的调节来选择性抑制促发炎作用的同时，保护对传染病的先天免疫力（Olleros等人，The Journal of Infectious Diseases的2009年4月1日第199（7）卷第1053-1063页）（Olleros et al.J Infect Dis.2009Apr1;199(7):1053-63）。

TNFR1选择性抑制也能通过TNFR1特异性抗体来实现。例如，单克隆小鼠抗体H398和美国专利US5736138中描述的对人TNFR1具有选择性的抗体显示了对TNF调节的信号转导和细胞毒性的有效抑制（Moosmayer等，Therapeutic immunology的1995年2月第2（1）卷第31-40页）（Moosmayer et al.Ther Immunol.1995Feb;2(1):31-40）。

专利WO2008/113515A2描述了一人源化的H398。具体地说，人源化抗体以Fab片段（IZI-06.1）产生，在体外的中和活性方面比得上亲本抗体的Fab片段。重要的是，H398抗体不会完全阻断TNF活性，这可通过高浓度时拮抗剂转换为部分激动剂来解释。这是由于在TNFR1交联中剂量依赖性增加，从而可能形成不依赖配体的、功能性的TNFR1信号复合物。因此，人们发现单价Fab片段优于全长（二价）抗体，这是因为其完全缺乏TNFR1交联能力，因此避免了任何内在的信号传输可能性。

TNFR1的抗体被发现通过诱导一模仿配体的反应而具有激动潜力。这种反应表明，通过结合多价的TNF三聚物实现受体的聚合，从而启动信号转导。

Espevik等人（The Journal of Experimental Medicine的1990年第171卷第415-426页）（J.Exp.Med.1990,171:415-426）描述了竞争性TNFR1受体抗体htr-9，这是一种模仿TNFalpha活性的全长抗体。

WO2010094720中描述了抗TNFR1单域抗体（dAbs）和包含这种单域抗体的结构。