[发明专利]补体因子H的纯化方法

权利要求书

1.一种从含有补体因子H的来源物中纯化补体因子H的方法，所述来源物例如是血液或血浆，特别是含因子H来源物的辛酸盐沉淀物，该辛酸盐沉淀物例如是通过向血液或血浆组分添加辛酸盐离子获得的，所述方法包括：

a）提供含因子H来源物，特别是重构辛酸盐沉淀物以提供含有补体因子H的溶液；

b）进行阳离子交换色谱，特别是作为第一次色谱分析步骤；

c）进行阴离子交换色谱；

d）进行羟基磷灰石色谱；

e）随后进行超滤/渗滤以获得补体因子H浓缩物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中进行肝素亲和色谱。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述方法包括用于病原体去除和/或灭活的至少一种以下方法：

a）溶剂/洗涤剂处理；

b）巴氏灭菌；

c）蒸汽热处理；

d）干燥热处理；或

e）纳滤。

4..根据权利要求1至3所述的方法，其中所述补体因子H浓缩物被冻干。

5.权利要求1至4的任何一项的方法获得的补体因子H。

6.根据权利要求5所述的补体因子H，其可通过包含以下步骤的方法获得：

a）重构辛酸盐沉淀以提供含有补体因子H的溶液；

b）通过溶剂/洗涤剂处理（S/D处理）进行病毒灭活；

c）在下述条件下进行阳离子交换色谱的色谱分析步骤：

将补体因子H结合至磺丙基型强阳离子交换树脂，使用包含20mM柠檬酸钠、pH 6.0的缓冲液洗涤，并用包含20mM柠檬酸钠、0.2 M NaCl、pH 6.0的洗脱缓冲液洗脱补体因子H；

d）在下述条件下进行阴离子交换色谱分析步骤：

将含有补体因子H的溶液（电导率0.1-0.5 mS/cm）施加于季铵型强阴离子交换树脂，使用包含20 mM Tris、pH 8.6的缓冲液洗涤，并用包含20 mM Tris、0.2M NaCl、pH 8.6的洗脱缓冲液洗脱补体因子H；

e）通过在陶瓷羟基磷灰石上加样步骤d）的组分进行陶瓷羟基磷灰石色谱，任选地在步骤d）的缓冲液交换已进行之后进行，并且用最高为1 M NaCl的氯化钠线性梯度来洗脱，并且收集在缓冲液的电导率为70 – 100 mS/cm时洗脱的组分；

f）任选地在下述条件下进行肝素亲和色谱分析步骤：将含有补体因子H的溶液施用于表面固定有肝素的树脂，使用含20mM柠檬酸钠、pH 6.0 缓冲液洗涤，并用含20 mM柠檬酸钠、0.2M NaCl、pH 6.0的洗脱缓冲液洗脱补体因子H；

g）随后通过超滤/渗滤获得补体因子H浓缩物。

7.根据权利要求5或6所述的补体因子H，其特征在于通过纳滤进行病毒减少步骤。

8.根据权利要求5至7的任何一项所述的补体因子H，其特征在于，所述补体因子H为液体或冻干制剂。

9.根据权利要求5至8的任何一项的补体因子H用来治疗与补体因子H缺陷或活性异常相关的疾病。

10.根据权利要求9的补体因子H，其中所述疾病选自膜增生性肾小球肾炎、致密物沉积病、溶血尿毒综合症、非典型溶血尿毒综合症或年龄相关性黄斑变性。

11.根据权利要求5至10的任何一项的补体因子H用来治疗缺血再灌注损伤、慢性肾病或自身免疫性脑脊髓炎。