[发明专利]补体因子H的纯化方法

说明书

本发明提供一种从含有因子H的物料中纯化高纯度和高生物活性的补体因子H的方法。获得的血浆补体因子H浓缩物可以在病理条件下被用作治疗性补体抑制剂，特别是在涉及替代性补体系统的异常活化的条件下。

背景技术

补体因子H是主要肝源的血浆糖蛋白，首先由Nilsson和Mueller-Eberhard发现（1965, J Exp Med, 122, 277-298）。它由20个短共有重复序列（short consensus repeats, SRC）的重复序列构成或由补体控制蛋白（complement control proteins, CCP）的重复序列构成，其中每个由60个氨基酸组成。由SCR模块构成的蛋白被认为是结构稳定的分子。将补体因子H暴露于不同的苛刻的化学和物理条件下并不会使其失活（Kask et al. (2004) Protein Sci. 13, 1356-1364）。

它通过多个分子机制，成为补体旁路的必要调节因素。首先，补体因子H作为因子I介导的激活的补体成分3b（C3b）剪切的必要辅因子。其次，它与因子B片段Bb竞争结合至C3b，从而抑制含有C3b和Bb的复合物的C3转化酶的形成，进而抑制补体扩增的发生。

再者，在补体因子H的分子结构中存在数个不同的结合域，用于结合不同的短共有重复序列（SCR）上的配体，这使得能够通过不同的结合亲和性来区分宿主和非宿主。换句话说，通过向带有足够配体的表面提供足够的结合亲和性，补体因子H能够区分在哪个表面阻止补体活化（宿主），而在哪个表面不阻止（例如，病原体）（Meri and Pangburn (1990) PNAS 87, 3982-3986）。

已经被证明的是，补体因子H与含有补体旁路异常活化的多种病理生理学病症有关，即膜增生性II型肾小球肾炎（也被称为致密物沉积病；在Pickering and Cook, Clin Exp Immunol (2008), 151, 210-230中被讨论）、非典型溶血尿毒综合症（在Noris and Remuzzi, Clin Exp Immunol (2008), 151, 199-20中被讨论）以及重要的年龄相关性黄斑变性（Hageman et al. (2005) PNAS 102, 7227-7232）。

有证据表明，在补体因子H的402位点的酪氨酸至组氨酸的氨基酸替换（Y402H）（在健康的西方人中有30%的显著的杂合子患病率），使个体易患年龄相关性黄斑变性（AMD）（Hageman, G. S. et al., Proc Natl Acad Sci U S A102, 7227-7232, (2005);  Edwards, A. O.et al., Science308, 421-424, (2005); Klein, R. J.et al., Science308, 385-389, (2005); Haines, J. L. et al., Science308, 419-421, (2005)）。补体因子H 402H风险变种增大了发展AMD的风险（对杂合子个体为2-4倍，对纯合子个体为5-7倍）。已发现Y402H多态性会使补体因子H功能失调具体表现为在损伤部位的减少的结合能力（Clark, S.J. et al., Biochem Soc Trans., 2010, 38, 1342-8; Kelly, U. et al.,  J Immunol., 2010, 185, 5486-94）和补充调节（Lauer, N. et al., J Immunol., 2011）。鉴于AMD病理-病因中补体的重大影响（Anderson, D.H. et al., Prog Retin Eye Res., 2010, 29, 95-112），研究纯化的CFH在AMD病人的治疗中作为治疗性补体抑制剂的价值是非常吸引人的，特别是在表达CFH风险变种的个体中。