[发明专利]热稳定性木霉属纤维素酶

权利要求书

1.一种木霉属宿主细胞，其包含：

修饰，其中所述修饰显著地减少或者防止所述木霉属宿主细胞产生热稳定性内切葡聚糖酶V(EGV)，

与启动子有效连接的编码目的多肽的外源目的核酸分子，所述启动子使得至少一种内源多肽和所述目的多肽各自被所述木霉属宿主细胞体内表达。

2.根据权利要求1所述的木霉属宿主细胞，其中所述修饰在参与EGV的表达的核苷酸中包含一个或者多个缺失或者中断。

3.根据权利要求2所述的木霉属宿主细胞，其中所述中断或者缺失包含EGV编码基因或者编码区或者用于EGV的表达的启动子或者调节元件的缺失或者中断。

4.根据权利要求3所述的木霉属宿主细胞，其中所述缺失或者中断包含egl5的缺失或者中断。

5.根据权利要求4所述的木霉属宿主细胞，其中所述缺失或者中断包含egl5中断。

6.根据权利要求4所述的木霉属宿主细胞，其中所述缺失或者中断包含egl5缺失。

7.根据权利要求6所述的木霉属宿主细胞，其中egl5通过同源重组进行缺失。

8.根据权利要求1所述的木霉属宿主细胞，其中所述内源多肽包含纤维素酶、半纤维素酶、蛋白酶或者它们的组合。

9.根据权利要求8所述的木霉属宿主细胞，其中所述热不稳定性酶包含纤维素酶或者半纤维素酶。

10.根据权利要求1所述的木霉属宿主细胞，其中所述木霉属是里氏木霉。

11.根据权利要求1所述的木霉属宿主细胞，其中所述目的多肽是疏水蛋白II。

12.根据权利要求10所述的木霉属宿主细胞，其中所述目的多肽是疏水蛋白II。

13.根据权利要求1所述的木霉属宿主细胞，其中所述目的多肽是热稳定的。

14.根据权利要求1所述的木霉属宿主细胞，其中所述目的多肽是热敏感的或者热不稳定的。

15.一种在根据权利要求1-12中任一项所述的经修饰的木霉属宿主细胞中制备所述目的多肽的方法，其中所述目的多肽是热稳定的，所述方法包括：

将所述经修饰的宿主细胞在适合于所述经修饰的宿主细胞的培养基中进行温育以产生所述热稳定性目的多肽和所述内源多肽，由此所述内源多肽和所述热稳定性目的多肽各自被所述经修饰的宿主细胞表达；以及

使所述热稳定性目的多肽和所述内源多肽经历高温，

其中所述高温足以显著地灭活所述内源多肽，但不足以灭活所述热稳定性目的多肽和EGV，如果它存在的话；

由此所述热稳定性目的多肽得以以活性或者功能形式产生，而基本上不存在来自所述内源多肽的活性。

16.根据权利要求15所述的方法，还包括在将所述目的多肽和所述内源多肽经历所述高温的步骤之前从所述经修饰的木霉属宿主细胞分离蛋白质混合物。

17.根据权利要求15所述的方法，其中所述经修饰的宿主细胞表达外切纤维二糖水解酶、内切葡聚糖酶、β-葡糖苷酶或者它们的组合。

18.根据权利要求15所述的方法，其中所述热稳定性目的多肽是可逆地可热变性的。

19.根据权利要求15所述的方法，其中所述高温是约90℃或者更高的温度。

20.根据权利要求15所述的方法，其中暴露于所述高温达约5分钟或者更长时间。

21.根据权利要求15所述的方法，其中暴露于所述高温达约60分钟或者更长时间。

22.一种控制由根据权利要求1-10中任一项所述的经修饰的木霉属宿主细胞表达的所述目的多肽的活性的方法，其中所述目的多肽是热敏感的或者热不稳定的，所述方法包括使所述热敏感性或者热不稳定性目的多肽和所述内源多肽经历高温，

其中所述高温足以灭活所述内源多肽和所述热敏感性或者热不稳定性多肽。

23.根据权利要求22所述的方法，其中所述内源多肽是纤维素酶。