[发明专利]用于切除靶核酸的核酸、组合物和方法

权利要求书

1.一种可切除的核酸构建体，从5’至3’方向包括：

(a)第一串联重复核酸；

(b)第一F-CphI核酸内切酶识别位点；

(c)靶核酸；

(d)第二F-CphI核酸内切酶识别位点；以及

(e)第二串联重复核酸。

2.根据权利要求1所述的可切除的核酸构建体，其中每个所述第一和第二串联重复核酸独立地由18至200个核苷酸碱基对组成。

3.根据权利要求1所述的可切除的核酸构建体，其中每个所述第一和第二串联重复核酸独立地由18至150个核苷酸碱基对组成。

4.根据权利要求1所述的可切除的核酸构建体，其中每个所述第一和第二串联重复核酸独立地由18至100个核苷酸碱基对组成。

5.根据权利要求1所述的可切除的核酸构建体，其中每个所述第一和第二串联重复核酸独立地由18-80个核苷酸碱基对组成。

6.根据权利要求1至5任意一项所述的可切除的核酸构建体，其中所述靶核酸编码选择性标记。

7.根据权利要求6所述的可切除的核酸构建体，其中所述选择性标记选自下组：

URA3、潮霉素B磷酸转移酶、氨基糖苷磷酸转移酶、博来霉素抗性基因和草胺膦N-乙酰转移酶。

8.根据权利要求1至7任意一项所述的可切除的核酸构建体，其进一步包括连接至所述第一串联重复核酸5'端的第一基因组整合位点，以及连接至所述第二串联重复核酸3'端的第二整合位点。

9.根据权利要求1至8任意一项所述的可切除的核酸构建体，其中所述靶核酸包含与编码F-CphI核酸内切酶的核酸可操作地连接的启动子元件。

10.一种宿主细胞，其包含权利要求1至7任意一项所述的可切除的核酸构建体。

11.根据权利要求10所述的宿主细胞，其进一步包含包括编码F-CphI核酸内切酶的核酸的载体。

12.根据权利要求11所述的宿主细胞，其中所述载体包含控制编码F-CphI核酸内切酶的核酸表达的启动子元件。

13.根据权利要求12所述的宿主细胞，其中所述启动子元件是诱导型启动子。

14.根据权利要求1至13任意一项所述的宿主细胞，其为酵母细胞。

15.根据权利要求14所述的宿主细胞，其为单倍体酵母细胞。

16.根据权利要求14所述的宿主细胞，其为二倍体酵母细胞。

17.根据权利要求14所述的宿主细胞，其为酿酒酵母细胞。

18.根据权利要求1至17任意一项所述的宿主细胞，其中所述可切除的核酸构建体整合至所述宿主细胞的基因组。

19.一种从宿主细胞的基因组中切除至少一个靶核酸的方法，所述宿主细胞包括权利要求1所述的可切除的核酸构建体，其中该方法包括：在所述宿主细胞中将所述可切除的核酸构建体与F-CphI接触。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述切除将启动子元件可操作地连接至感兴趣的基因。

21.根据权利要求19所述的方法，其中所述靶核酸编码选择性标记。

22.根据权利要求21所述的方法，其中所述选择性标记选自下组：URA3、潮霉素B磷酸转移酶、氨基糖苷磷酸转移酶、博来霉素抗性基因和草胺膦N-乙酰转移酶。

23.根据权利要求1至22任意一项所述的方法，其中所述宿主细胞是酵母细胞。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述宿主细胞是单倍体酵母细胞。

25.根据权利要求23所述的方法，其中所述宿主细胞是二倍体酵母细胞。

26.根据权利要求23所述的方法，其中所述宿主细胞是酿酒酵母细胞。