[发明专利]用于心脏修复的骨髓衍生CD271前体细胞

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2010年8月27日提交的美国临时申请号61/377,661的优先权，其完整内容通过引用纳入本文。

技术领域

本发明的实施方式针对用骨髓衍生间充质前体细胞治疗心血管疾病的方法。

背景技术

心力衰竭导致美国医疗系统直接和间接花费332亿美元(1,2)且有此诊断的大部分患者有来自先前MI的疤痕化心肌。左室功能是患有心肌梗塞(MI)病人的存活和生活质量的最重要决定因素(1,3)。心肌在梗塞形成后的再生潜能很有限且目前医学中的主要探索是基于细胞的组织再生。此探索有希望改变许多慢性疾病的治疗。在慢性缺血性心肌病(影响超过400万美国人的疾病)领域，基于细胞的成功治疗会对患者发病率和死亡率产生巨大影响，降低此疾病的社会负担。为了推进此领域发展，过去五年中已进行大量尝试以获得成功的细胞治疗，采用骨髓衍生细胞的策略已在早期临床试验中测试(4,5)。这些试验已大大推进对细胞递送方法的理解并建立安全特性；然而，理想的细胞源仍有待充分建立。

发明内容

提供此发明内容以介绍本发明的概述，来简要说明本发明的特性和实质。提交时应理解这不用于解读或限制权利要求书的范围或意义。

本发明的实施方式涉及含成人骨髓衍生的间充质干细胞前体的组合物。这些细胞体内给予，例如给予心脏并使心肌再生。

在优选的实施方式中，预防或治疗心血管疾病或紊乱的方法包括从对象的骨髓分离CD271⁺间充质干细胞前体(MSC)；给予患者治疗有效量的经分离CD271⁺间充质干细胞(MSC)前体。

在一个实施方式中，CD271⁺MSC分离自有低亲和性神经生长受体的骨髓细胞(NGFR；CD271)。CD271⁺干细胞分离自含以下的供体(或来源)：自体、同源、同种异体或异种。MSC前体细胞分化成包含以下的至少一种谱系：心肌、血管或内皮谱系。

在另一个实施方式中，分离的前体间充质干细胞离体培养并扩增然后给予患者。在一个实施方式中，扩增非贴壁干细胞并给予患者。在另一个实施方式中，所述前体间充质干细胞可选在一段时间内以不同浓度给予患者。在一个实施方式中，所述前体间充质干细胞可选用心脏衍生基质细胞调整的培养基调理。

在另一个实施方式中，可选给予患者一种或多种试剂，所述试剂包含至少一种：细胞因子、趋化因子、生长因子或分化因子。

在优选的实施方式中，成体干细胞包含具有CD271⁺表型的骨髓间充质干细胞(MSC)前体衍生细胞。

其他方面如下所述。

附图简要说明

图1显示CD271⁺细胞形态。准备细胞离心涂片并用瑞氏姬姆萨(Wright Giemsa)染色。

图2A-2C显示由CD271⁺细胞(图2A；每个T75cm²瓶170,000个细胞)；BMMNC(图2B;每个T75cm²瓶1500万个细胞)和C)CD271^-细胞(图2C；每个T75cm²瓶1700万个细胞)形成MSC。

图3显示培养第10天的典型CFU-F集落。

图4显示CD271⁺细胞在特氟龙袋(Teflon bag)中7、14和21天的培养。

图5显示非贴壁间充质干细胞(NA-MSC)的流式分析。同种型对照染色以绿线显示且CD105-FITC在阴影区内。

图6A和6B显示人骨髓CD271⁺细胞的成骨和脂肪细胞分化。成骨和脂肪细胞分化如方法中所述来进行。成骨分化的存在通过第14天FAST BCIP/NBT染色的碱性磷酸酶(AP)表达来显示(图6A；x/100)。分化成脂肪细胞通过第11天的油红O染色来显示(图6B；x/100)。显示3个实验的代表性示例。

图7显示培养的CD271⁺细胞中心脏标记的表达。

图8显示治疗组的超声心动图比较。