[发明专利]用于向神经系统细胞导入基因的腺相关病毒粒子

说明书

技术领域

本发明涉及用于导入基因的重组腺相关病毒（rAAV）粒子。更具体而言，本发明涉及用于高效率地向神经系统细胞导入目的基因的能够通过血脑屏障的重组腺相关病毒（rAAV）粒子、以及含有该病毒粒子的组合物等。

背景技术

中枢神经障碍给公共卫生方面带来了大的问题。据推测，即使仅仅由神经细胞的变性脱落导致的认知功能障碍的阿尔茨海默病（Alzheimer），在日本国内也有60万人以上的患者。现在，很多中枢神经障碍是采用治疗药进行全身给药来治疗。但是，当全身给药时，很多情况下药物无法通过血脑屏障，往往是低效率的，很多有潜力的有用的治疗用蛋白质等不能予以全身给药。

利用腺相关病毒（AAV）作为基因治疗用的病毒来源的载体的方法是公知的（例如，WO2003/018821、WO2003/053476、WO2007/001010等）。但是，当试图将基因导入脑等神经系统细胞时，有必要研究上述血脑屏障等的防御机能、神经系统细胞的导入效率、表达效率、更安全的给药方法等的问题。

Nakai H等（Unrestricted hepatocyte transduction with adeno-associated virus serotype8vectors in mice.J.Virol.2005Jan；79（1）：214-24.）中记载了，将基因导入肝细胞作为目的，使用了通过EF1α启动子对LacZ基因的标记进行表达的8型AAV载体AAV8-EF1α（-nlslacZ）的例子。

Foust KD等（Intravascular AAV9preferentially targets neonatal neurons and adult astrocytes.Nat.Biotechnol.2009Jan；27（1）：59-65.）中记载了关于具有9型AAV（AAV9）的外壳蛋白，通过鸡β-肌动蛋白杂合启动子（chicken β-actin hybrid promoter）（CB）来表达荧光蛋白GFP的自补（self-complementary（sc））型载体。另外，Duque S等（Intravenous Administration of Self-complementary AAV9Enables Transgene Delivery to Adult Motor Neurons.Mol.Ther.2009Jul；17（7）：1187-96.）（结果的概要参照表1）中公开了具有9型AAV（AAV9）的衣壳蛋白、并且在巨细胞病毒（CMV）立即早期启动子（cytomegalovirus immediate early promoter）的控制下表达荧光蛋白GFP的自补型载体（scAAV9-GFP）。

虽然通过这些重组AAV9载体的血管内给药将基因导入了脑（新生儿的神经元、成人的星形胶质细胞等），但由于需要含有使病毒基因组成为sc型的逆向序列的缘故，该基因组中可整合的基因成为非sc型时一半的长度。具体而言，在sc型载体中可整合的基因，被限制为含启动子和poly（A）区域的2kb短的基因。基于该限制，重组病毒载体的治疗用途也受到限制。

如上所述，虽然以往制作了各种重组腺相关病毒载体，但是目前尚未发现能够采用简易的给药方法通过生物体的血脑屏障、特别是将基因有效地导入脑神经系统细胞并且能够利用有望更广泛的治疗用途的非sc型AAV基因组的重组AAV载体。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：Nakai H等（J.Virol.2005Jan；79（1）：214-24.）

非专利文献2：Foust KD等（Nat.Biotechnol.2009Jan；27（1）：59-65.）

非专利文献3：Duque S等（Mol.Ther.2009Jul；17（7）：1187-96.）

发明内容

发明要解决的课题

如上所述的状况中，希望开发一种病毒载体（病毒粒子）且该病毒载体能够通过采用高效率且更简易的给药方法将目的治疗用基因送入到生物体的脑、脊髄等内存在的神经细胞、特别是脑神经细胞中，由于能够更广泛地选择目的基因的长度，从而能够包装非sc型病毒基因组。

解决课题的方法