[发明专利]放射性缀合法

说明书

发明领域

本发明涉及用于体内成像的放射性药物领域，具体而言涉及用放射性同位素标记生物靶向分子的方法。本发明的方法特别适于与自动合成仪一起使用。亦提供可用于所述方法的呈无菌形式的前体，以及包含这类前体的盒(cassette)。

发明背景

WO 2004/080492 A1公开了用于生物靶向载体的放射性氟化的方法，所述方法包括使式(I)化合物与式(II)化合物反应：

或者，

使式(III)化合物与式(IV)化合物反应：

其中：

R1为醛部分、酮部分、受保护的醛(例如缩醛)、受保护的酮(例如缩酮)，或者诸如二醇或N端丝氨酸残基等官能团(functionality)，可使用氧化剂将所述官能团迅速而有效地氧化成醛或酮；

R2为选自伯胺、仲胺、羟胺、肼、酰肼、氨基氧基(aminoxy)、苯肼、氨基脲和氨基硫脲的基团，以及优选为肼、酰肼或氨基氧基；

R3为选自伯胺、仲胺、羟胺、肼、酰肼、氨基氧基、苯肼、氨基脲或氨基硫脲的基团，以及优选为肼、酰肼或氨基氧基；

R4为醛部分、酮部分、受保护的醛(例如缩醛)、受保护的酮(例如缩酮)，或者诸如二醇或N端丝氨酸残基等官能团，可使用氧化剂将所述官能团迅速而有效地氧化成醛或酮；

以分别得到式(V)或(VI)缀合物：

其中X为–CO-NH-、-NH-、–O-、-NHCONH-或–NHCSNH-，以及优选为-CO-NH-、-NH-或–O-；Y为H、烷基或芳基取代基；以及

式(II)、(IV)、(V)和(VI)化合物中的接头基团选自

其中：

n为0-20的整数；

m为1-10的整数；

p为0或1的整数

Z为O或S。

Poethko等[J.Nucl.Med., 45(5), 892-902 (2004)]公开了使用放射性同位素¹⁸F放射性标记肽的方法，其中将氨基氧官能化的肽与[¹⁸F]-氟苯甲醛缩合以得到具有如下肟醚键合的标记肽：

Schottelius等[Bioconj.Chem., 19(6), 1256-1268 (2008)]进一步发展了Poethko等的方法。Schottelius等使用氨基氧官能化肽，其中用N-Boc (Boc =叔丁氧羰基)保护基保护氨基氧基的胺。在[¹⁸F]-氟苯甲醛存在下，在酸性pH (pH = 2)于75 ℃经由N-Boc基团的脱保护来原位生成所需的氨基氧官能化肽。Schottelius等使用5倍摩尔过量的Boc保护的前体，因为在所述反应条件下脱保护不是定量的。

Mezo等[J.Pept.Sci., 17, 39-46 (2010)]描述了与Boc保护的氨基氧官能化肽的上述肟连接化学相关的一些问题。因此，已知的是，最初形成的自由氨基氧肽可酰化未反应的Boc保护的氨基氧肽，导致不合乎需要的副产物。亦已知的是，官能化肽的自由氨基氧基对羰基化合物的反应性很高。所以，可与存在于反应混合物中或任何后续纯化步骤中的任何外来醛或酮发生不必要的缩合。这类醛或酮可以是痕量的存在于所用溶剂中的丙酮，或者甲醛(例如来自增塑剂)。对于抗癌药与肽的缀合和[¹⁸F]-氟苯甲醛与肽的缀合二者，Mezo等关注于解决此问题。Mezo等通过在作为‘羰基捕获剂’的十倍摩尔过量的自由(氨基氧)乙酸(Aoa)存在下，进行Boc-氨基氧肽的脱保护来解决所述问题。然后将脱保护的氨基氧基-肽和过量的Aoa冻干并在4 ℃储存。临近肟连接反应之前，将冻干混合物复溶，并通过HPLC或Sep-Pak +C18柱分离过量的Aoa。Mezo等提供了其中利用此技术将非放射性(即¹⁹F) 4-氟苯甲醛与氨基氧官能化的促生长素抑制素肽缀合的实例。Mezo等未提供关于¹⁸F-放射性标记的任何数据。

因此对于放射性标记肽及其它生物靶向分子的改进方法仍有需要。

发明内容

本发明提供了经由氨基氧官能团放射性标记生物靶向分子(BTM)的改进方法。本发明提供了保护基途径，所述途径克服了先有技术中公认的杂质问题，而无需：