[发明专利]胚胎干细胞来源的心肌细胞以及包含所述心肌细胞作为活性成分的细胞治疗剂

权利要求书

1.由胚胎干细胞产生心肌细胞的方法，包括：

(a)培养胚胎干细胞，以获得培养物；并

(b)在无血清培养基中培养所述培养物，以纯化心肌细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述胚胎干细胞是人胚胎干细胞或小鼠胚胎干细胞。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述无血清培养基包含胰岛素、转铁蛋白、孕酮、腐胺和亚硒酸盐。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述无血清培养基包含N2补充物。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述无血清培养基是包含N2补充物的DMEM培养基。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述培养物包含胚状体。

7.如权利要求1所述的方法，还包括在步骤（a）后在细胞水平分离所述培养物。

8.由权利要求1至7中任一项所述的方法产生的心肌细胞，具有如下特征：

(i)表达选自以下的标志物：α-辅肌动蛋白、肌钙蛋白I(cTn I)、ANP、GATA4、Nkx2.5、MEF-2c、MYH6、MYH7、Con43、肌球蛋白重链(α-MHC或sMHC)、肌球蛋白轻链(MLC-2α或MLC-2v)、心肌肌动蛋白、cTnT和cTnl；

(ii)具有囊样形状、混合的形状、漂浮或肌肉样形状；和

(iii)表现出脉搏跳动。

9.产生心肌细胞体的方法，包括：

（a）培养胚胎干细胞，以获得培养物；

（b）在无血清培养基中培养所述培养物，以纯化成心肌细胞；并

（c）在无血清培养基中培养纯化的成心肌细胞。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述无血清培养基包含胰岛素、转铁蛋白、孕酮、腐胺和亚硒酸盐。

11.如权利要求9所述的方法，其中所述无血清培养基包含N2补充物。

12.如权利要求9所述的方法，其中所述无血清培养基是包含N2补充物的DMEM培养基。

13.如权利要求9所述的方法，其中所述心肌细胞体表现出同步的跳动。

14.如权利要求9所述的方法，其中所述心肌细胞体的直径为200至500μm。

15.由权利要求9-14中任一项所述的方法产生的心肌细胞体。

16.用于治疗心脏病的细胞治疗剂，其包含作为活性成分的心肌细胞体。

17.如权利要求16所述的细胞治疗剂，其中所述心肌细胞体表现出同步的跳动。

18.治疗心脏病的方法，包括将治疗有效量的权利要求16所述的细胞治疗剂给予个体。