[发明专利]化学增强型引物组合物、方法和试剂盒

权利要求书

1.一种组合物，其包含：寡核苷酸序列、带负电荷部分(NCM)以及无或至少一个耐核酸酶键，如图3A至3J和图4A-4C所示。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述至少一个耐核酸酶键位于所述寡核苷酸序列的末端3'端，如图2所示。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述NCM包括多个带负电荷部分，其中所述NCM连接到末端5'端或位于所述寡核苷酸序列内。

4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述NCM选自亚磷酰胺、(Cn)间隔区、分支(Cn)间隔区、氨基酸、核苷酸和核苷酸类似物，其中n可为1至9的任意整数。

5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述NCM包含多个(Cn)间隔区。

6.根据权利要求5所述的组合物，其中当n等于3时，NCM包含(C3)_x间隔区，其中x等于至少5、至少6、至少8、至少9、至少10、至少15、至少18或更多个线性排列的C3间隔区或分支排列的[(C3)_x]z，其中z等于2或3。

7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述分支(C3)_x可为二倍体或三倍体。

8.根据权利要求1所述的组合物，其中所述寡核苷酸序列包括通用引物序列或基因特异性引物序列。

9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述通用引物序列选自M13、US1、T7、SP6和T3。

10.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物耐核酸酶消化。

11.根据权利要求1所述的组合物，其中所述NCM可为[C3]_x和[C6]_y间隔区的组合，其中y等于1至20的任意整数。

12.根据权利要求1所述的组合物，其还包含染料-标记。

13.根据权利要求12所述的组合物，其中将所述染料-标记连接到所述NCM或所述寡核苷酸序列。

14.根据权利要求13所述的组合物，其中所述染料-标记是荧光染料-标记。

15.根据权利要求10所述的组合物，其中所述核酸酶选自核酸外切酶Ⅰ、外切酶Ⅲ、Pfu和DNA聚合酶I。

16.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物形成化学强化型引物。

17.一种用于对核酸测序的组合物，其包含：含有寡核苷酸序列、带负电荷部分(NCM)和至少一个耐核酸酶键的化学增强型引物。

18.根据权利要求17所述的组合物，其中所述至少一个耐核酸酶键位于所述引物的末端3'端。

19.根据权利要求17所述的组合物，其中所述NCM包括多个带负电荷部分，其中NCM连接到末端5'端或位于所述寡核苷酸序列内。

20.根据权利要求19所述的组合物，其中所述NCM选自亚磷酰胺、(Cn)间隔区、氨基酸、核苷酸和核苷酸类似物，其中n可为1至9的任意整数。

21.根据权利要求20所述的组合物，其中所述NCM包含多个(Cn)间隔区。

22.根据权利要求21所述的组合物，其中当n等于3时，所述NCM包含(C3)_x间隔区，其中x等于至少5、至少6、至少8、至少9、至少10、至少15、至少18、至少20、至少24或更多个线性或分支排列的C3间隔区。

23.根据权利要求22所述的组合物，其中所述分支(C3)_x可为二倍体或三倍体。

24.根据权利要求17所述的组合物，其中所述寡核苷酸序列构成通用引物。

25.根据权利要求24所述的组合物，其中所述通用引物选自M13、US1、T7、SP6和T3。

26.根据权利要求17所述的组合物，其中所述化学强化型引物包含耐核酸酶键。

27.根据权利要求17所述的组合物，其还包含聚合酶、核酸酶、脱氧三磷酸核苷、双脱氧三磷酸核苷和染料-标记。