[发明专利]蛋白纯化方法

权利要求书

1.一种纯化蛋白的方法，其包括：

a. 提供包含所述蛋白的样品；

b. 经俘获层析树脂处理所述样品来提供包含所述蛋白的第一洗脱物；

c. 在所述第一洗脱物中灭活病毒来提供包含所述蛋白的灭活的洗脱物；

d. 经至少一个深层过滤器处理所述灭活的洗脱物来提供包含所述蛋白的过滤后洗脱物；和

e. 经至少一个离子交换膜处理所述过滤后洗脱物来提供包含所述蛋白的第二洗脱物。

2.权利要求1的方法，其中在过滤器列中提供所述深层过滤步骤和所述离子交换膜步骤。

3.权利要求1的方法，其中所述俘获层析树脂选自亲和树脂、离子交换树脂、混合式树脂和疏水作用树脂。

4.权利要求1的方法，其中所述俘获层析树脂选自蛋白A树脂、蛋白G树脂、蛋白A/G树脂和蛋白L树脂。

5.权利要求1的方法，其中所述蛋白选自蛋白片段、抗体、单克隆抗体、免疫球蛋白和融合蛋白。

6.权利要求1的方法，其中所述样品是细胞培养。

7.权利要求1的方法，其中所述样品在经所述俘获层析树脂处理前进行澄清。

8.权利要求7的方法，其中所述样品通过选自离心、微滤、超滤、深层过滤、无菌过滤和用去污剂处理的澄清方法进行澄清。

9.权利要求1的方法，其中所述病毒灭活包括选自用酸、去污剂、化学品、核酸交联剂、紫外线、γ射线和热处理的方法。

10.权利要求9的方法，其中病毒灭活包括降低所述第一洗脱物的pH至从约为3至约为4的pH。

11.权利要求10的方法，其中所述第一洗脱物在病毒灭活过程中温育约30至约90分钟。

12.权利要求1的方法，其中在深层过滤步骤前将所述灭活的洗脱物调节至pH 5至10。

13.权利要求1的方法，其中所述深层过滤步骤包括经至少一个深层过滤器过滤。

14.权利要求1的方法，其中所述深层过滤步骤包括经至少两个串联或并联排列的深层过滤器过滤。

15.权利要求1的方法，其中所述深层过滤步骤随后为盒无菌过滤步骤。

16.权利要求1的方法，其中所述离子交换膜包括Q膜。

17.权利要求16的方法，其中所述Q膜步骤以流通模式进行。

18.权利要求1的方法，其中所述离子交换膜步骤随后为盒无菌过滤步骤。

19.权利要求1的方法，其中所述灭活的洗脱物经一个深层过滤器处理并且所述过滤后的洗脱物经串联的所述离子交换膜处理。

20.权利要求1的方法，其中所述第二洗脱物进一步进行额外的层析步骤。

21.权利要求20的方法，其中所述额外的层析步骤选自疏水作用层析、混合式层析和阳离子交换层析。

22.权利要求1的方法，其中所述第二洗脱物进一步进行纳米过滤步骤。

23.权利要求1的方法，其中所述第二洗脱物进一步进行超滤和渗滤步骤。

24.一种纯化蛋白的方法，其包括：

a. 提供包含所述蛋白的样品；

b. 对所述样品进行澄清来提供澄清的样品；

c. 经俘获层析树脂处理所述澄清的样品来提供包含所述蛋白的第一洗脱物；

d. 在所述第一洗脱物中灭活病毒来提供包含所述蛋白的灭活的洗脱物；

e. 经至少一个深层过滤器处理所述灭活的洗脱物来提供包含所述蛋白的过滤后洗脱物；

f. 经至少一个离子交换膜处理所述过滤后洗脱物来提供包含所述蛋白的第二洗脱物；

g. 经额外的层析树脂处理所述第二洗脱物来提供包含所述蛋白的第三洗脱物；

h. 将所述第三洗脱物进行纳米过滤来提供包含所述蛋白的纳米过滤后洗脱物；和

i. 将所述纳米过滤后洗脱物进行超滤和渗滤。

25.权利要求24的方法，其中所述额外的层析树脂包括混合式层析树脂。