[发明专利]蛋白纯化方法

说明书

相关申请

本申请要求享受于2010年10月11日提交的美国临时申请系列号61/391,762的优先权，其完整地通过引用并入本文。

背景技术

本发明通常涉及纯化蛋白的方法。

由于抗体组成了市场上大部分的治疗用生物制剂，因此尤其对于治疗用抗体而言，大规模蛋白纯化的经济性很重要。除了它们的治疗价值，例如，单克隆抗体在诊断领域也是重要的工具。已开发了大量单克隆抗体并且用在许多疾病的诊断、妊娠诊断和药物检测中。

通常的纯化方法涉及多步层析步骤以满足纯度、产量和通量要求。这些步骤一般涉及俘获、中间纯化或精制以及最终精制。亲和层析（蛋白A或G）或离子交换层析常用作俘获步骤。通常，俘获步骤随后伴随至少另两步中间纯化或精制层析步骤以保证足够的纯度和病毒清除率。在其它方法中，中间纯化或精制步骤一般经亲和层析、离子交换层析或疏水作用来完成。在常规方法中，最终精制步骤可通过离子交换层析、疏水作用层析或凝胶过滤层析来完成。这些步骤去除了包括宿主细胞蛋白（HCP）、DNA、滤出的蛋白A、聚集体、片段、病毒和来自产物流和细胞培养的其它小分子杂质在内的处理和产物相关的杂质。

发明内容

简而言之，本发明在一个实施方式中涉及纯化蛋白的方法，所述方法包括提供含有蛋白的样品、通过俘获层析树脂处理样品来提供包含蛋白的第一洗脱物、在第一洗脱物中灭活病毒来提供包含蛋白的灭活的洗脱物、通过至少一个深层过滤器处理灭活的洗脱物来提供包含蛋白的过滤后洗脱物、和通过至少一个离子交换膜处理过滤后洗脱物来提供包含蛋白的第二洗脱物。

此外，本发明在一个实施方式中涉及纯化蛋白的方法，所述方法包括提供包含蛋白的样品、使样品澄清来提供澄清的样品、通过俘获层析树脂处理澄清的样品来提供包含蛋白的第一洗脱物、在第一洗脱物中灭活病毒来提供包含蛋白的灭活的洗脱物、通过至少一个深层过滤器处理灭活的洗脱物来提供包含蛋白的过滤后洗脱物、通过至少一个离子交换膜（其与深层过滤器串联装配或在单独步骤中使用）处理过滤后洗脱物来提供包含蛋白的第二洗脱物、通过额外的层析树脂处理第二洗脱物来提供包含蛋白的第三洗脱物、将第三洗脱物进行纳米过滤来提供包含蛋白的纳米过滤后洗脱物、并将纳米过滤后洗脱物进行超滤和纳米过滤或渗滤。

附图说明

图1显示了本方法一个实施方式的示意图。

图2显示了本方法另一实施方式的示意图。

图3显示了本方法又一实施方式的示意图。

图4显示了本方法又一实施方式的示意图。

图5显示了280 nm处的ProSep? Ultra Plus蛋白A俘获层析洗脱图。

图6显示了302 nm处的ProSep? Ultra Plus蛋白A俘获层析洗脱图。

图7显示了280 nm处的Phenyl Sepharose? HP层析图。

图8显示了302 nm处的Phenyl Sepharose? HP层析图。

具体实施方式

现将详细地提供本发明实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本发明。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本发明进行多种修改和变化而不背离本发明的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。

因此，旨在本发明覆盖落入所附权利要求的范围及其等同范围中的此类修改和变化。本发明的其它对象、特征和方面公开于以下详细描述中或从中是显而易见的。本领域普通技术人员应理解本讨论仅是示例性实施方式的描述，而非意在限制本发明更广阔的方面。

在一个实施方式中，本发明包括蛋白纯化系统及方法。本纯化系统实施方式的示意图提供于图1-4中。

在本发明的一个实施方式中，提供包含蛋白的样品。任何包含蛋白的样品均可以用在本发明中。包含蛋白的样品可以包含例如细胞培养或鼠的腹水。作为实例，可以在搅动罐生物反应器中在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达蛋白。蛋白可以是本领域公知的任何蛋白或其片段。在多种实施方式中，蛋白是融合蛋白如Fc融合蛋白。