[发明专利]用于在真菌细胞中表达基因的启动子

权利要求书

1.一种用于生产多肽的方法，包括：

（a）在有益于生产所述多肽的介质中培养真菌宿主细胞，其中所述真菌宿主细胞包括与选自以下的启动子可操作地连接的编码所述多肽的多核苷酸，所述启动子选自：（i）包括与SEQ ID NO：1具有至少60%序列一致性的核苷酸序列的启动子；（ii）包括在至少中等严格条件下与SEQ ID NO：1或其全长互补链杂交的核苷酸序列的启动子；（iii）包括SEQ ID NO：1的启动子；（iv）包括（i）、（ii）或（iii）的子序列并保持启动子活性的启动子；以及（v），（i）、（ii）、（iii）或（iv）的突变、杂合或串联启动子；其中编码所述多肽的多核苷酸对于所述启动子是外源的；以及

（b）从培养介质中分离所述多肽。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述启动子包括与SEQ IDNO：1具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性的核苷酸序列。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述启动子包括在中等严格条件、中-高等严格条件、高等严格条件、或很高等严格条件下与SEQID NO：1或其全长互补链杂交的核苷酸序列。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述启动子包括SEQ ID NO：1的多核苷酸序列或其具有启动子活性的子序列，或者由SEQ ID NO：1的多核苷酸序列或其具有启动子活性的子序列构成。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述启动子是包括SEQ ID NO：1的多核苷酸序列的一个或多个部分的杂合启动子。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述启动子是包括SEQ ID NO：1的多核苷酸序列或其保持启动子活性的子序列的串联启动子。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中所述多肽对于所述真菌宿主细胞是原生的或外源的。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其中所述真菌宿主细胞是丝状真菌细胞。

9.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其中所述真菌宿主细胞是酵母细胞。

10.一种分离的启动子，选自：（i）包括与SEQ ID NO：1具有至少60%序列一致性的核苷酸序列的启动子；（ii）包括在至少中等严格条件下与SEQ ID NO：1或其全长互补链杂交的核苷酸序列的启动子；（iii）包括SEQ ID NO：1的启动子；（iv）包括（i）、（ii）或（iii）的子序列并保持启动子活性的启动子；以及（v），（i）、（ii）、（iii）或（iv）的杂合或串联启动子。

11.根据权利要求10所述的启动子，其包括与SEQ ID NO：1具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列一致性的核苷酸序列。

12.根据权利要求10所述的启动子，其包括在中等严格条件、中-高等严格条件、高等严格条件、或很高等严格条件下与SEQ ID NO：1或其全长互补链杂交的核苷酸序列。

13.根据权利要求10所述的启动子，其包括SEQ ID NO：1的多核苷酸序列或其具有启动子活性的子序列，或者由SEQ ID NO：1的多核苷酸序列或其具有启动子活性的子序列构成。

14.根据权利要求13所述的启动子，其是包括SEQ ID NO：1的多核苷酸序列的一个或多个部分的杂合启动子。

15.根据权利要求13所述的启动子，其是包括SEQ ID NO：1的多核苷酸序列或其保持启动子活性的子序列的串联启动子。

16.一种核酸构建体，包括与权利要求10～15中任一项所述的启动子可操作地连接的编码多肽的多核苷酸。

17.一种重组宿主细胞，包括权利要求16所述的核酸构建体。