[发明专利]同等型富集的抗体制备物及其获得方法

说明书

本文中报告了一种用于获得抗体制备物的方法，包括在强阳离子交换层析材料上的步式洗脱方法。

发明背景

完善确立并广泛使用用于蛋白质纯化的不同方法，如用微生物蛋白质的亲和层析（例如蛋白A或蛋白G亲和层析）、离子交换层析（例如阳离子交换（羧甲基树脂）、阴离子交换（氨乙基树脂）和混合模式交换）、亲硫吸附（例如用β-巯基乙醇和其它SH配体进行）、疏水性相互作用或芳香族吸附层析（例如用苯基-Sepharose、亲氮杂芳烃(aza-arenophilic)树脂、或间氨基苯基硼酸进行）、金属螯合物亲和层析（例如用Ni(II)-和Cu(II)-亲和材料进行）、大小排阻层析和电泳方法（如凝胶电泳、毛细管电泳）(Vijayalakshmi,M.A.,Appl.Biochem.Biotech.75(1998)93-102)。

Fahrner,R.L.等，于Biotechnol.Gen.Eng.Rev.18(2001)301-327报告了药用抗体的产业纯化，尤其是层析工艺的开发、操作和确认。Follman,D.K.和Fahrner,R.L.(J.Chrom.A1024(2004)79-85)报告了抗体纯化工艺的因素筛选，其使用无蛋白A的三个层析步骤进行。Necina,R.等(Biotechnol.and Bioeng.60(1998)689-698)报告了通过展现高电荷密度的离子交换介质从细胞培养物上清液捕捉人单克隆抗体。在WO99/057134中报告了通过离子交换层析进行蛋白质纯化。在WO2004/076485中报告了通过蛋白A和离子交换层析进行抗体纯化。在US5,429,746中报告了抗体纯化。在WO2003/066662中报告了蛋白质纯化。

WO2006/125599报告了一种用于纯化抗体的方法。在WO2004/076485中报告了通过蛋白A和离子交换层析进行抗体纯化。

发明概述

已经发现了抗体同等型的层析分离和/或富集在阳离子交换层析材料上在流动相的适当电导率增加的情况中是有可能的。需要的电导率增加是至多50%，即第二溶液具有的电导率为第一溶液的电导率的101%至150%。

如此，如本文中报告的一个方面是用于提供抗体制备物的方法，包括以下步骤：

a)将包含抗体的不同同等型的缓冲溶液施加到阳离子交换层析材料，

b)将具有第一电导率的第一溶液施加到所述阳离子交换层析材料，由此所述抗体同等型保持与所述阳离子交换层析材料结合，并

c)将具有第二电导率的第二溶液施加到所述阳离子交换层析材料，并由此获得抗体制备物，

其中所述第二溶液的电导率超出所述第一溶液的电导率至少1%但不超过50%。

在一个实施方案中，所述第二溶液的电导率超出所述第一溶液的电导率至少1%但不超过20%。

在一个实施方案中，所述第二溶液的电导率超出所述第一溶液的电导率至少1%但不超过15%。

在一个实施方案中，所述第二溶液的电导率超出所述第一溶液的电导率至少1%但不超过10%。

在一个实施方案中，步骤a)的溶液与步骤b)的溶液具有相同的电导率。在一个实施方案中，所述包含抗体的不同同等型的缓冲溶液具有第一电导率，且所述第一溶液具有相同的（第一）电导率。

在一个实施方案中，所述阳离子交换层析材料包含可膨胀基质。在一个实施方案中，所述可膨胀基质是琼脂糖。

在一个实施方案中，所述阳离子交换层析材料是强阳离子交换层析材料。在一个实施方案中，所述强阳离子交换层析材料是磺丙基阳离子交换层析材料。

在一个实施方案中，在单一步骤中将所述第一溶液改变成所述第二溶液。在一个实施方案中，所述单一步骤是从100vol%第一溶液至100vol%第二溶液的变化。

在一个实施方案中，在线性梯度中将所述第一溶液改变成所述第二溶液。在一个实施方案中，所述线性梯度是在约30个柱体积上。在一个实施方案中，所述线性梯度是在约20个柱体积上。

在一个实施方案中，所述第一溶液包含20mM柠檬酸钠。

在一个实施方案中，所述第二溶液包含20mM柠檬酸钠和5mM氯化钠。

在一个实施方案中，所述第一溶液包含25mM三（羟甲基）氨基甲烷和10mM氯化钠。

在一个实施方案中，所述第二溶液包含25mM三（羟甲基）氨基甲烷和70mM氯化钠。

在一个实施方案中，所述第二溶液包含25mM三（羟甲基）氨基甲烷和45mM氯化钠。