[发明专利]诱导针对EGFRvIII的免疫应答的方法和组合物

说明书

相关申请案的交叉参考

本发明要求2010年11月17日提交的美国临时专利申请第61/414,850号的优先权，该美国临时专利申请的包括所有表格、图和权利要求的全部内容据此以引用的方式并入本文。

发明背景

提供关于本发明背景的以下讨论只是为了帮助读者理解本发明，并非承认描述或构成本发明的现有技术。

EGFR3基因(c-erbB-1)在恶性人组织中扩增和过表达。这种扩增经常与基因结构重排相关联，从而导致野生型c-erb-1的细胞内和跨膜结构域中缺乏框内缺失突变体。一类在一些恶性胶质瘤和非小细胞肺癌中鉴定的缺失突变体被称为EGFRvIII。EGFRvIII是这样的突变，其中氨基酸6–273（在细胞外结构域中，残基1是紧接在信号序列之后的残基）缺失，并且甘氨酸插入在残基5与残基274之间。EGFRvIII突变的N-末端10个残基的序列为LEEKKGNYVV(SEQ ID NO:1)。

患有表达EGFRvIII的乳腺癌的患者具有可检测的对抗这种肽的体液和细胞免疫应答，揭示它充当免疫原性新抗原。来自这种接合体(LEEKKGNYVVTDH;SEQ ID NO:2)的称为PEPvIII的13氨基酸肽已用于给患有表达EGFRvIII的肿瘤的人免疫接种。在最近公布的研究中，缀合至KLH的PEPvIII被施用给没有显示出进展的放射影像学证据，经完全切除(>95%)、辐射和替莫唑胺(temozolomide)治疗的新诊断的多形性胶质母细胞瘤(GBM)患者。在14位经免疫患者中的6位中观察到针对EGFRvIII的体液免疫应答，而17位中的3位表现出阳性DTH应答。用疫苗和替莫唑胺治疗的患者的中位总生存期为从病理诊断时间起的26.0个月，相比之下，仅接受替莫唑胺的匹配队列的中位总生存期仅为15.0个月。这些令人鼓舞的结果支持表达EGFRvIII的疫苗的实用性，并且揭示更强效的疫苗，即诱发稳健、持久、强有力的抗原特异性T细胞应答的疫苗，可改善抗-EGFRvIII应答的强度和持续时间。

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogene)是革兰氏阳性细胞内细菌，其因其作为疫苗载体的应用而受到探究。用单核细胞增生李斯特菌感染能诱发杀死单核细胞增生李斯特菌感染的细胞和控制感染所必需的强有力的CD8+T细胞应答。单核细胞增生李斯特菌的减毒提高了该载体的安全性100-1,000倍，同时维持或增强它的免疫原性。该载体可被遗传操纵的简易性，以及简单的生产方法使得单核细胞增生李斯特菌成为癌症疫苗的有引力的平台。

本领域中仍然需要刺激针对表达EGFRvIII的恶性肿瘤的有效免疫应答的组合物和方法。

发明概要

本发明提供了使用重组编码和表达多聚EGFRvIII抗原的细菌递送多聚EGFRvIII抗原疫苗的组合物和方法。

在本发明的第一方面，本发明涉及在受试者中诱导对抗EGFRvIII的T细胞应答的方法。这些方法包括向受试者施用包含表达一种或多种免疫性多肽的细菌的组合物，所述免疫性多肽的氨基酸序列包含多个（2、3、4、5，或更多个拷贝）EGFRvIII多肽序列，所述多个（2、3、4、5，或更多个拷贝）EGFRvIII多肽序列的序列各自包含EEKKGNYV(SEQ ID NO:3)。在某些实施方案中，这些EGFRvIII来源的序列可包含LEEKKGNYV(SEQ ID NO:4)、LEEKKGNYVVTDH(SEQ ID NO:2)，或PASRALEEKKGNYVVTDHGSC(SEQ ID NO:5)或者由其组成。如下文所描述，最优选表达一种（多种）本文所描述的免疫性多肽的单核细胞增生李斯特菌细菌。

如本文还描述的，此类方法可刺激在所述受试者中的针对重组表达的EGFRvIII多肽的免疫应答，包括体液应答和抗原特异性T细胞（CD4+和/或CD8+）应答中的一种或多种。此类多肽产生CD4+和/或CD8+T细胞应答的能力可以通过本文详细描述的以及本领域中熟知的多种方法证实。优选地，当递送给受试者时，本发明组合物诱导选自由IL-12p70、IFN-γ、IL-6、TNFα和MCP-1组成的组的蛋白质中的一种或多种，优选每一种的血清浓度在所述递送后24小时增加；并且诱导对抗EGFRvIII的CD4+和/或CD8+抗原特异性T细胞应答。