[发明专利]具有琥珀酰CoA:乙酰乙酸转移酶活性的多肽及其编码多核苷酸

说明书

对相关申请的交叉引用

本申请要求2010年10月29日美国临时申请号61/408,235的优先权权益，其内容有如其全文列于下文而通过提述并入本文。

涉及序列表

本申请包含计算机可读形式的序列表，其通过提述并入本文。

涉及生物材料的保藏

本申请包含对于生物材料保藏的引用，所述保藏通过提述并入本文。

发明背景

技术领域

本发明涉及具有琥珀酰CoA:乙酰乙酸转移酶活性的多肽和编码所述多肽的多核苷酸。本发明还涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞以及产生和使用所述多肽的方法。

背景技术

对于未来石油供应的忧虑促进了在可再生能源以及可再生的其它原材料的来源领域的研究。生物燃料，如乙醇和生物塑料(例如特别是聚乳酸)为可使用微生物直接从农业来源制备的产品的实例。然后，其它所需产品可使用非酶化学转化来衍生，例如将乙醇脱水为乙烯。

乙烯的聚合提供聚乙烯，其为具有广泛范围的有用用途的塑料类型。乙烯传统上通过精炼的非可再生性化石燃料来产生，但将生物来源的乙醇脱水为乙烯提供了从可再生的碳源得到乙烯的替代途径，即来自可发酵糖的发酵的乙醇。该工艺已应用于产生“绿色聚乙烯(Green Polyethylene)”，其除了在碳同位素分布方面的微小差异之外，与从石油产生的聚乙烯完全相同。

类似地，可将异丙醇和正丙醇脱水为丙烯，其随即可聚合为聚丙烯。如同聚乙烯，使用生物来源的起始材料(即异丙醇或正丙醇)会得到“绿色聚丙烯(Green Polypropylene)”。然而，不像聚乙烯，从可再生的来源产生聚乙烯起始材料已证明具挑战性。已提出的对于丙烯产生的努力报道于WO2009/049274，WO2009/103026，WO2008/131286和WO2010/071697。然而，尚无对丙醇有效的发酵工艺的报道。显而易见，生物产生丙醇的工艺的成功开发需要仔细选择代谢途径中的酶，以及有效的总体代谢工程策略。

在本领域中，提供具有琥珀酰CoA:乙酰乙酸转移酶活性、可协助促进乙酰乙酸和/或异丙醇产生的多核苷酸会是有利的。本发明提供了具有琥珀酰CoA:乙酰乙酸转移酶活性的多肽及其编码多核苷酸。

发明内容

本发明涉及具有琥珀酰CoA:乙酰乙酸转移酶活性的分离的蛋白复合物，其分离的多肽亚基，和编码这些亚基的分离的多核苷酸。

在一个方面，本发明涉及具有琥珀酰CoA:乙酰乙酸转移酶活性的分离的蛋白复合物，其包含第一多肽亚基和第二多肽亚基，其中所述第一亚基选自：

(a)多肽，其与SEQ ID NO:3的成熟多肽具有至少60%序列同一性；

(b)多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸在至少低严格条件下与SEQ ID NO:1或2的成熟多肽编码序列，或其全长互补链杂交；

(c)多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸与SEQ ID NO:1或2的成熟多肽编码序列具有至少60%序列同一性；

(d)SEQ ID NO:3的成熟多肽包含一个或多个(几个)氨基酸的取代、缺失和/或插入的变体；和

(e)(a)，(b)，(c)，或(d)的第一亚基的片段，其连同第二亚基具有琥珀酰CoA:乙酰乙酸转移酶活性；和

其中所述第二亚基选自：

(a)多肽，其与SEQ ID NO:6的成熟多肽具有至少60%序列同一性；

(b)多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸在至少低严格条件下与SEQ ID NO:4或5的成熟多肽编码序列，或其全长互补链杂交；

(c)多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸与SEQ ID NO:4或5的成熟多肽编码序列具有至少60%序列同一性；

(d)SEQ ID NO:6的成熟多肽包含一个或多个(几个)氨基酸的取代、缺失和/或插入的变体；和

(e)(a)，(b)，(c)，或(d)的第二亚基的片段，其连同第一亚基具有琥珀酰CoA:乙酰乙酸转移酶活性。

在一个方面，本发明涉及具有琥珀酰CoA:乙酰乙酸转移酶活性的蛋白复合物的分离的多肽亚基，其中所述亚基选自：

(a)多肽，其与SEQ ID NO:3或6的成熟多肽具有至少60%序列同一性；

(b)多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸在至少低严格条件下与SEQ ID NO:1，2，4，或5的成熟多肽编码序列，或其全长互补链杂交；