[发明专利]透明质酸-蛋白质结合物及其制备方法

权利要求书

1.用于制备透明质酸（HA）-蛋白质结合物的方法，包括：

使HA-醛衍生物与蛋白质的N端反应，其中，在所述HA-醛衍生物内，醛基被引入到透明质酸或其盐中。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述HA-醛衍生物为在所述HA或其盐的葡糖醛酸骨架中引入至少一个醛基的衍生物。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述HA-醛衍生物具有至少一个位于末端环处的醛基，所述环在所述HA或其盐的葡糖醛酸骨架处开环。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述HA-醛衍生物是由所述HA或其盐与氧化剂反应而获得的。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述氧化剂能使所述HA或其盐的葡糖醛酸骨架开环而形成至少一个醛基。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述氧化剂为高碘酸盐。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，通过控制所述HA或其盐与所述氧化剂的反应时间来控制所述HA或其盐的醛取代率。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述HA-醛衍生物为在所述HA或其盐的葡糖醛酸骨架上存有的羧基的位置上引入醛基的衍生物。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，HA-醛衍生物是通过如下方式制得的：让所述透明质酸或其衍生物的羧基与含有二胺基或二酰肼基的分子反应，然后让该衍生物分子与另一个含有丙二醛基的分子反应。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述HA-醛衍生物具有大于5%且小于30%的醛取代率。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述HA-醛衍生物具有大于30%且小于100%的醛取代率。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述HA-醛衍生物与所述蛋白质的N端的反应是在存在用于诱导还原性胺化的试剂时进行的。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述用于诱导还原性胺化的试剂为氰基硼氢化钠(NaBH₃CN)，或三乙酰氧基硼氢化钠(NaBH(OCOCH₃)₃)。

14.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述HA-醛衍生物与蛋白质的反应是在PH5～7的缓冲液中进行的。

15.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述HA-醛衍生物与蛋白质的反应是在PH5.5～6.5的缓冲液中进行的。

16.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进一步包括，用保护基将所述HA-醛衍生物中未与所述蛋白质反应的未反应醛基保护起来。

17.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述HA或其盐具有10,000～3,000,000达尔顿（Da）的分子量。

18.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，与每个HA-醛衍生物的分子结合的所述蛋白质的分子数量为1～20个。

19.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白质选自干扰素α（IFN-α）、干扰素β、干扰素γ、胰岛素、胰岛素样生长因子1（IGF-1）、生长激素、促红细胞生成素、粒细胞集落刺激因子（GCSFs）、粒细胞/巨噬细胞-集落刺激因子（GM-CSFs）、白细胞介素-1α、白细胞介素-1β、白细胞介-3、白细胞介素-4、白细胞介素-6、白细胞介素-2、表皮生长因子（EGFS）、降钙素、促肾上腺皮质激素（ACTH）、肿瘤坏死因子（TNF）、atobisban、布舍瑞林、西曲瑞克、地洛瑞林、去氨加压素、强啡肽A（1-13）、依降钙素、eleidosin、依替巴肽、生长激素释放激素-II（GHRHII）、戈那瑞林、戈舍瑞林、组氨瑞林、亮丙瑞林、赖氨酸、奥曲肽、催产素、加压素、促胰液素、辛卡利特，特利加压素，胸腺五肽，胸腺素α1、曲普瑞林、比伐卢定、卡贝缩宫素、环孢素、exedine、兰瑞肽、促黄体激素释放激素（LHRH）、那法瑞林、甲状旁腺激素、普兰林肽、T-20（恩夫韦地）、胸腺法新或齐考诺肽。