[发明专利]透明质酸-蛋白质结合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及透明质酸蛋白质结合物及其制备方法。

背景技术

至今，对持续长时间的蛋白质药物的药效的剂型的研究是通过与生物相容性的可生物降解的聚合物的结合反应来进行研发剂型。根据剂型的形状及所要结合的有效药用成分，上述蛋白质药物的药效的持续时间可延长至几周。为研发这种剂型，除了维持剂型的药效及增加药效的持续时间外，也要考虑与有效药用成分结合的聚合物的生物相容性。此外，还需考虑由与聚合物结合而引起的蛋白质药物的活性的降低等的问题。

如研究这种剂型的例子，目前正在积极地进行通过将有效药用成分与生物相容性的可生物降解的聚乙二醇（PEG）或透明质酸（HA）进行结合来应用于药物传递系统中的研究。

然而，用于结合PEG与有效药用成分的反应，即用于PEG化修饰（PEGylation）反应的PEG是获美国食品和药物管理局（FTA）批准的具代表性的用于活的生物体的聚合物，但有报道称，当重复注射作为药物传送载体的PEG-脂质（liposome）结合物时，将会出现加速血液清除（accelerated blood clearance，ABC）现象，即向体内给药的药物消失得越快。对用于治疗肝脏疾病的蛋白质药物α-干扰素（IFNα）而言，实际投入生产的是每周一次的注射剂型的PEG化产品。由于用来治疗丙型肝炎的PEG化干扰素药物显示出严重的副作用，就会发生很多患者放弃他们的治疗的情况。此外，干扰素药物展现的抗病毒效果在CV基因型1患者中只占约50％。因此，需要研发新的药物。使用PEG的药物传递载体只会增加体内保留时间，而并未展现出向特定组织的传递特性，因此需要靶向部位（moiety），可使之传递至特定组织内以治疗特定疾病。

而且，当HA与有效药用成分结合时，将所得结合物特异性地传递至肝脏组织内。然而，所述HA与有效药用成分之间的结合反应的生物接合率低，从而展示出了所述生物接合率的极限。

此外，当如PEG或HA的聚合物与所述蛋白质药物结合时，所述聚合物可以与蛋白质的胺基酸序列中各种反应性基团进行非特异性反应，从而会破坏所述蛋白质的三级结构，进而会降低所述蛋白质药物的生物活性。

发明内容

技术问题

本发明涉及提供用于制备透明质酸-蛋白质结合物的方法，通过该方法，在维持蛋白质药物的最高生物活性的同时，能够展现高的生物接合率并可适用于各种水溶性有效药用成分中，而且本发明还提供由该方法制得的HA-蛋白质结合物及其用途。

技术方案

本发明的一方面提供用于制备HA-蛋白质结合物的方法。该方法包括在HA或其盐中引入醛基的HA-醛衍生物与蛋白质的N端反应。

本发明的另一方面提供HA-蛋白质结合物，该HA-蛋白质结合物是通过在HA或其盐中引入醛基的HA-醛衍生物与蛋白质的N端结合而成。

下面，将更为详细地描述本发明的示例性实施例的HA-蛋白质结合物及其制备方法。

HA为一种高分子量的线性多糖，其包含作为重复单元的、由D-葡糖醛酸（GlcA）与N-乙酰-D-葡糖胺（GlcNAc）通过β1,3-糖苷键结合而成的二糖。所述HA的二糖重复单元可用下面化学式1表示。

[化学式1]

根据本发明，将所述术语“透明质酸”或HA解释为包括含有作为重复单元的、化学式1的二糖的HA，以及包括含有作为重复单元的、从化学式1的二糖骨架衍生出的衍生物的HA衍生物。所述HA衍生物是指具有在化学式1的二糖结构中羧基、羟基、乙酰基或二糖重复单元的末端被其他取代基取代的结构的HA。例如，所述取代基可以为选自氢、C1-6烷基、C1-6烷基羰基（alkylcarbonyl group）、羧基、羟基以及乙酰基中的至少一个取代基。

透明质酸包括所述HA或其衍生物的盐。例如，该透明质酸盐可以包括钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、铝盐等，但本发明不限于这些盐。

本发明涉及提供用于制备HA-蛋白质结合物的方法，该方法包括在HA或其盐中引入醛基的HA-醛衍生物与蛋白质的N端反应。

在本领域中使用的用于结合HA和蛋白质的方法是，将蛋白质的胺基与HA的羧基结合的方法。然而，这种方法存在以下问题，由于通常会通过使用接头（linker）来形成所述蛋白质的胺基与所述HA的羧基之间的键，从而使反应复杂且反应效率，即生物接合率会降低，而且所述HA的羧基可与在蛋白质的胺基酸序列及蛋白质的N端上以复数存在的赖氨酸的胺基进行非特异性反应。