[发明专利]替萘普酶的药用组合物

说明书

技术领域

本发明涉及被称为替萘普酶(TNK)的人组织纤溶酶原激活剂衍生物的药用组合物，该药用组合物用于治疗导致主要或次要类型的中风的脑动脉栓塞，例如急性缺血性中风(AIS)。本发明还涉及与已知治疗药物相比具有最佳效能和安全性的制剂，这可以通过对含有特定量的作为活性成分的TNK的所述组合物进行临床试验进行判断。

背景技术

组织纤溶酶原激活剂(TPA)参与了血液循环系统中非特定血凝块的分解。TNK是TPA的衍生物，其中对天然序列中的7个氨基酸进行了修饰从而使得新分子对纤维蛋白具有特异性并改变了其药代动力学特性，并由此使药效动力学效果发生了改变。TNK是分子量为70KDa的527个氨基酸的酸性糖蛋白。它已经被批准作为药物用于治疗急性心肌梗塞和某些其它血栓形成以及不同器官中与血管破裂有关的栓塞。最近，考虑其可以用于治疗急性缺血性中风，进行了该适应症的多个临床试验，但是这些试验对于TNK用于治疗AIS的安全且有效的剂量还没有获得任何结论性的证据。

纤溶酶原激活剂是能够激活纤溶酶原从而产生能够使得纤维蛋白降解的丝氨酸蛋白酶纤溶酶的酶。用作药物的纤溶酶原激活剂包括：a)链激酶[一种细菌蛋白]，b)尿激酶，[一种在肾脏中合成的酶]和c)人组织纤溶酶原激活剂[一种血管内皮组织产生的酶]。还有开发其它可能成为溶解纤维蛋白药物的酶。这些激活剂的作用机制有所不同：链激酶能够与产生纤溶酶活性的纤溶酶原形成复合物，尿激酶能够直接裂解纤溶酶原，TPA能够与纤维蛋白和纤溶酶原形成三元复合物使得纤溶酶原激活和凝块在位溶解。天然的人TPA血浆半衰期通常为8－10分钟。然而，希望延长半衰期从而可以在较短的时间内实施纤维蛋白溶解疗法，获得了更好的疗效。因此，多个氨基酸和蛋白质的缺失突变体被制备出来并对其超出TPA的改善特性进行了实验。TNK具有6个突变，与tPA相比，其半衰期延长2倍，达20－24分钟，改善了其特性，例如对纤维蛋白凝块的特异性提高，同时对纤溶酶原激活剂抑制剂-1的亲和力降低。

TNK首先公开于US5385732，它通过DNA重组技术采用已确立的哺乳动物细胞系制备。多个其它专利覆盖了TNK制备和应用的不同方面，包括US5728567、US5714145、US5366886、US5094953、US5407819和US6506598。US5407819公开了通过氨基酸序列中特定氨基酸的置换而制备TPA变异体的方法。US5612029公开了TPA的一种变异体，它可以在野生型人TPA序列的103－105上的任何位置糖基化并且在117位置上不存在功能性糖结构。US5520911公开了编码TPA变异体的DNA序列的制备。US5424198公开了通过采用突变型或野生型DHFR基因以及tPA基因组合转换而生产TPA的方法。这些和多个其它文件也涵盖了多种医学疾病或适应症，其中TNK可以用作药物治疗血栓形成。US20080107641包含的疾病之一为AIS。然而，该申请没有公开确定用于治疗人类患者AIS的安全和有效量的TNK的任何方法。相反，在无需给出对已确定的有效量进行测定和评价的任何具体方法的情况下，即可可以根据现有数据库的理论模型预测使用安全剂量。因此，目前的现有技术不能满足对TNK用于治疗AIS以及有效药用组合物(制剂)用于治疗AIS的安全和有效量判断的需要。本发明满足了上述需要并提供了用于在人类患者中治疗AIS的TNK的改善的且更有效的制剂，它是安全的并且易于在短时间内给药。

有许多研究提及了TNK在治疗AIS中的应用，然而，它们未能公开其中所含有的TNK的量与本申请公开的制剂具有相同安全性和有效性(相对于副作用而言)的TNK的任何制剂。另外，用于制备制剂的TNK采用灌流连续发酵系统(perfusion-based continuous fermentation system)的新技术制备，该技术以前没有被用于制备TNK蛋白质。

采用TNK治疗AIS的各种制剂是已知的。然而，到目前为止没有一种制剂经过风险效益分析被任何药品管理机构认可为是安全和有效的。由于认识到这种缺陷，所以本申请公开的TNK制剂具有治疗AIS的安全和有效药物所期望的特性。在本申请中公开的用于制备高纯度TNK的方法的某些方面在本领域中是已知的。然而，本申请中采用的用于生产、制备、筛选、试验并且特别是临床判断用于AIS治疗的TNK制剂的多个新原理在本领域中是未知的。

发明内容