[发明专利]核酸样品的制备方法及组合物

权利要求书

1. 一种在通用缓冲液中制备核酸文库的方法，所述方法包括：

a)将核酸样品与通用缓冲液混合，其中所述通用缓冲液包含dNTP和引物；

b)将所述通用缓冲液与多种基本上纯化的酶接触，其中所述酶有聚合酶活性、激酶活性和磷酸酶活性，并且其中所述接触在使得产生扩增的核酸的条件下进行；

c)处理所述通用缓冲液使得产生剪切的扩增核酸；

d)处理所述通用缓冲液以灭活所述聚合酶的活性；和

e)将所述通用缓冲液与连接酶和核酸接头在使得产生连接接头的核酸文库的条件下接触；

其中以上步骤在所述通用缓冲液中完成而无需核酸纯化。

2. 权利要求1的方法，其中所述核酸样品包含基因组DNA，并且其中所述扩增的核酸通过全基因组扩增来产生。

3. 权利要求1的方法，其中所述步骤a)-e)在单一容器中进行。

4. 权利要求1的方法，还包括处理含有所述连接接头的核酸文库的所述通用缓冲液使得蛋白和dNTP从所述通用缓冲液中去除。

5. 权利要求1的方法，其中所述接头包含发夹结构的引物，并且其中所述连接接头的核酸文库包含环形模板。

6. 权利要求5的方法，还包括用能够消化存在的任何非环化核酸的至少一种核酸外切酶处理含有所述环形模板的所述通用缓冲液。

7. 权利要求6的方法，还包括加热含有所述核酸外切酶的所述通用缓冲液使得所述核酸外切酶失活。

8. 权利要求1的方法，其中所述通用缓冲液还包含乳化剂。

9. 权利要求1的方法，其中所述通用缓冲液还包含三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)。

10. 权利要求1的方法，其中所述通用缓冲液还包含二价金属阳离子。

11. 权利要求1的方法，其中所述通用缓冲液还包含无机盐。

12. 权利要求1的方法，其中所述通用缓冲液还包含聚腺苷酸。

13. 权利要求1的方法，其中所述通用缓冲液还包含α-连接的二糖。

14. 权利要求1的方法，其中所述通用缓冲液还包含还原剂。

15. 权利要求1的方法，其中所述通用缓冲液还包含白蛋白或白蛋白样蛋白。

16. 权利要求1的方法，其中所述核酸样品的量为10 pg-50 ng。

17. 一种组合物，其包含：a)缓冲剂、b)乳化剂、c)二价金属阳离子、d)无机盐、e)聚腺苷酸、f) α-连接的二糖、g)还原剂和h)白蛋白或白蛋白样蛋白。

18. 权利要求17的组合物，还包含三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)。

19. 权利要求17的组合物，其中所述乳化剂为聚山梨醇酯。

20. 权利要求19的组合物，其中所述聚山梨醇酯选自：Tween 20、Tween 40、Tween 60或Tween 80。

21. 权利要求17的组合物，其中所述无机盐为硫酸铵。

22. 权利要求17的组合物，其中所述α-连接的二糖包含海藻糖。

23. 权利要求17的组合物，其中所述还原剂包含二硫苏糖醇(DTT)。

24. 权利要求17的组合物，其中所述组合物还包含dNTP和引物。

25. 权利要求17的组合物，还包含多种基本上纯化的酶，其中所述酶有聚合酶活性、激酶活性和磷酸酶活性。